求小鼠脾组织的Th1/Th2/Th17/Treg细胞流式检测试剂

olesama001

想做小鼠脾组织的Th1/Th2/Th17/Treg细胞流式检测，目前处于准备购买试剂阶段。
准备购买以下试剂：淋巴细胞分离液，PMA，离子霉素，PMI1640，胎牛血清，
        Rat antimouse CD3 APC,

        Rat antimouse CD8 PerCP
        Rat antimouse IL-17-FITC
        Rat antimouse IFNγPE
        Rat antimouse IL-4 PE
        Rat antimouse Foxp3-PE
        Rat antimouse CD25-PE
1.有什么错误，遗漏多余的请老师们指出
2.还需要什么同型对照吗？
3.小鼠用  Rat antimouse抗体行吗？


                                                

olesama001

另外用什么公司的抗体比较好？

niwanmao

你们的流式细胞仪是什么配置？

你如果要测Treg，CD25和foxP3不能是同样的荧光。
你如果自己不会选，建议可以参考已发表的相关文献选择。

olesama001

niwanmao 发表于 2014-11-26 20:03
你们的流式细胞仪是什么配置？

你如果要测Treg，CD25和foxP3不能是同样的荧光。

倪老师，我周末去咨询了一下，我们的流式细胞仪是4通道的 APC,PE, PerCP,FITC。先检测TH1，TH2把CD3，CD8， IFNγ和 IL-4每种加一种染色剂，那检测TH17，IL-17是否就必须另一管检测了。另外Treg细胞液单独一管，CD3，CD8，CD25，foxp3每种加一种染色剂对吗。另外哪种因子加哪种染色剂是比较固定的吗，还是说只要染色剂不同就可以？

olesama001

niwanmao 发表于 2014-11-26 20:03
你们的流式细胞仪是什么配置？

你如果要测Treg，CD25和foxP3不能是同样的荧光。

PE-cy7与PE可以同时加吗，都在一个通道

olesama001

吧里张明霞老师的PPT里说 可以用 IL-17-FITC， IFNγPE， IL-4 PE，检测TH1和TH2细胞， IFNγ和 IL-4 可以用一样的染色剂吗，是不是应该是 IL-17-PE， IFNγFITC， IL-4 PE

niwanmao

olesama001 发表于 2014-11-30 16:37
倪老师，我周末去咨询了一下，我们的流式细胞仪是4通道的 APC,PE, PerCP,FITC。先检测TH1，TH2把CD3，CD8 ...

可以这样搭配，供参考：

Th1/Th2：CD3 FITC、CD8 PerCP、IFNγ APC、IL-4 PE
Th17： CD3 FITC、CD8 PerCP、IL-17 PE
Treg： CD3 FITC、CD8 PerCP、CD25 APC、foxp3 PE

olesama001

niwanmao 发表于 2014-11-30 19:30
可以这样搭配，供参考：

Th1/Th2：CD3 FITC、CD8 PerCP、IFNγ APC、IL-4 PE

谢谢倪老师

呓er

我做过小鼠脾脏的TH1 TH2 TH17 除了佛波酯 其他都是在eBioscience买的 做出来还不错 荧光用的 直接做的CD4和胞内因子的双标 没敢标太多 这个操作卡时间点卡的非常严格 稍有不慎就失败了

v2002lichao

呓er 发表于 2014-12-4 13:49
我做过小鼠脾脏的TH1 TH2 TH17 除了佛波酯 其他都是在eBioscience买的 做出来还不错 荧光用的 直接做的CD4 ...

双标如何做的Treg?