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[其它] 受体占用(receptor occupancy)的流式检测

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发表于 2014-11-26 22:58:22 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
请问倪老师,受体占用(receptor occupancy)的流式检测,有没有比较标准的检测方法。

看到过一个方法,用某受体的特异抗体和生物素化特异抗体来做,先用该特异抗体梯度稀释,然后与定量细胞孵育,洗涤后,加定量的生物素化抗体进行竞争孵育(或占位?),洗涤后再加链霉亲和素荧光孵育,最后上机,随着特意抗体的浓度梯度下降,受体占用率下降。

为什么不能直接只用生物素化特异抗体,做梯度结合,然后算各梯度的受体占用呢


谢谢

发表于 2014-11-27 12:37:14 | 显示全部楼层
学习了这个新用法,原来是在现在这种抗体药物的药效学评估上使用。原来流式的应用范围还是很大的。

从你描述的步骤看,没有采用荧光抗体,里面的特异抗体就是不带荧光的抗体,先用它进行梯度结合后,再用生物素化抗体去竞争,最后对生物素化抗体用链霉素亲和素二抗标记荧光。

其实原理是一样的。如果你换成用生物素化抗体做梯度结合,那么你就不要用二抗,而是直接用带荧光的特异抗体做竞争孵育。
发表于 6 天前 | 显示全部楼层
您好,我也在开发RO的应用,能否交流下?
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