受体占用（receptor occupancy)的流式检测

zark_00

请问倪老师，受体占用（receptor occupancy)的流式检测，有没有比较标准的检测方法。

看到过一个方法，用某受体的特异抗体和生物素化特异抗体来做，先用该特异抗体梯度稀释，然后与定量细胞孵育，洗涤后，加定量的生物素化抗体进行竞争孵育（或占位？），洗涤后再加链霉亲和素荧光孵育，最后上机，随着特意抗体的浓度梯度下降，受体占用率下降。

为什么不能直接只用生物素化特异抗体，做梯度结合，然后算各梯度的受体占用呢


谢谢

niwanmao

学习了这个新用法，原来是在现在这种抗体药物的药效学评估上使用。原来流式的应用范围还是很大的。

从你描述的步骤看，没有采用荧光抗体，里面的特异抗体就是不带荧光的抗体，先用它进行梯度结合后，再用生物素化抗体去竞争，最后对生物素化抗体用链霉素亲和素二抗标记荧光。

其实原理是一样的。如果你换成用生物素化抗体做梯度结合，那么你就不要用二抗，而是直接用带荧光的特异抗体做竞争孵育。

melodysz

您好，我也在开发RO的应用，能否交流下？

飞翔

melodysz 发表于 2019-1-10 09:22
您好，我也在开发RO的应用，能否交流下？

现在开发的如何了，也在看资料

毛豆24821

哪家公司，我们可以多交流。我们也正在做

yzhang

一起，一起，我也在做

毛豆24821

为什么不能直接只用生物素化特异抗体，做梯度结合，然后算各梯度的受体占用呢

回答：因为一般RO是结合动物实验一起的，动物给药的抗体是不会标记Biotin的。所以是有反向间接的方式检测。

wym_henlius

没有标记的药物可以认为是标准品，用这些没有标记药物的响应拟合标准曲线，用于测定未知样品的RO值。