B细胞分群设门

十二郎

各位好，小弟想请教几个问题，本人是做实验组与对照组两组小鼠的B细胞分群实验，在骨髓中检测ProB、PreB和immB，在脾脏中检测TB、FoB、MZ及MZP。然后在自己分析流式数据的时候，会有以下疑问：
1、淋巴门的大小应该圈多大，是圈大一点好，还是小一点好，一般圈门在60%左右，是否可行？但有时并不是每一个样品的淋巴门都会一致，有的会是50%，而有的会是70%，那么是不是应该统一淋巴门大小呢？
2、假使说以实验组样本1进行分析设门以后，可不可以对其他样品进行批量化处理？若批量化处理，因为样品处理并不是都很好，所以有时候门的位置就会有一些偏差；若不批量化处理，那么实验组与对照组的设门条件就会不太一样，这种情况下应该怎样处理呢？

niwanmao

1、如果你希望淋巴细胞分群好一些，设门更精确一些，可以试着加CD45设门。
2、门发生变动是很正常的事情，仪器的误差、鞘液流的问题，只要你圈的是目标细胞，就没有一点问题。

君子兰

不知道你采用的是哪些细胞标志？以骨髓标本为例，CD45/SS双参数点图中,那几群B淋巴细胞基本呈现一个连续的过程，而且proB pre B和骨髓其他前体细胞也混在一起，这种情况下， 最好有B细胞的特异性标志，如CD79a（胞内染色）或CD22（胞内染色），先把B细胞选择出来，然后再根据B细胞的各个阶段的标志将B细胞分群。