modfit细胞周期分析相关

huikaimin

modfit 分析周期时，CV很重要，是我们熟知的事情。 CV又跟我们做出来的那个峰的宽度息息相关。
在实验的过程中我遇到了这样的情况。有以下几个问题：

１.坐标轴上面有小黑三角形，应该是表示细胞计较集中，峰分布的比较尖锐吧？所以软件自动就能识别出来了。那么问题来了。同样的数据，我圈门的位置不一样，就能导致以下的结果，我知道在正常情况下，我们应该圈住所有的细胞，这样才有意义。但是，我想问，为什么会照成这样的效果呢？是否表示，我们圈中的门里的细胞状态更好，更有利于软件分析呢？或者说，我们在遇到这样的问题的时候，直接在获取细胞的时候，在ｃｅｌｌｑｕｅｓｔ里面就把这样的细胞给圈选出来呢？

２.在同样的数据分析的时候，Ｇ１和Ｇ２期的比值很重要。
默认比值为２　的时候　吧，ＣＶ是１０以上，　　改成１.５之后，ＣＶ果断变成了５以内。但是ＲＣＳ的值又上去了。
诊断时ＣＶ和ＲＣＳ都是绿色的是最好的了。但是，当他们不能共存的时候，我们是怎么看呢？是主要看ＣＶ吗？或者，再重做实验，做出都是绿色的数据。还有就是　Ｇ１和Ｇ２的比值是如何确定的呢？是凭着图形的走向？自己的经验设置的吗？有什么条件吗？

niwanmao

1、你这里的细胞成群单一，应该将整群细胞都圈上，没有其它选择。
2、CV值之所以变小，因为本身拟合就不正确，是假性变小。而且你圈门故意圈不对，如何期望它是正确的变化。首先圈正确，然后G2/G1的比值通过sync wizard来确定下来，就可以直接看结果了。

总之，按照正确的步骤走即可，不需要这么纠结。

huikaimin

谢谢解答

ddn111

个人觉得，在排除RNA干扰之外，影响CV关键是细胞培养或干预因素时间过长，导致胞内DNA不均一所致，流速和细胞密度过大也会影响，但不是主因！{:soso_e112:}

huikaimin

ddn111 发表于 2014-12-3 18:22
个人觉得，在排除RNA干扰之外，影响CV关键是细胞培养或干预因素时间过长，导致胞内DNA不均一所致，流速和细 ...

做细胞周期只能用低速吧。

niwanmao

huikaimin 发表于 2014-12-9 10:54
做细胞周期只能用低速吧。

是的。低速可以获得较低的CV。尽可能用低速。

小小研究生

我也遇到了和你一样的图形，你最终是怎么处理？还望解答谢谢！

niwanmao

小小研究生 发表于 2014-12-24 10:20
我也遇到了和你一样的图形，你最终是怎么处理？还望解答谢谢！

1、正确设门。
2、低速获取。

robocop

niwanmao 发表于 2014-12-24 11:02
1、正确设门。
2、低速获取。

看来要低速啊，哎呀，有的时候为了快快过样，我们经常最大流速跑，看来这样不太好啊

小小研究生

robocop 发表于 2014-12-27 10:12
看来要低速啊，哎呀，有的时候为了快快过样，我们经常最大流速跑，看来这样不太好啊 ...

我们也是用的最高速，结果不怎么好。