2015年值得期待的流式仪器、试剂和软件

niwanmao

2014年已经过去，流式细胞术领域也陆陆续续出现了一些新生事物，有些您可能已经尝试过，有些您可以了解过，那么，2015年，其中有哪些值得我们继续期待，有哪些新的仪器、试剂和软件会继续带给我们惊喜呢？



一、仪器
流式细胞仪的发展方向各有不同：
一个方向是越来越小、越紧凑、越强大，适应高端研究用户需求；
一个方向是越来越易用，以使得流式细胞仪更容易被所有研究者所接受。

在2015年，分析型流式细胞仪，有以下几款机器值得我们关注：
1、BD Fortessa X50。这款仪器在Cyto2014会议上报道过，可检测20种以上荧光参数。这种趋势使得我们有可能实现质谱细胞术那种级别的多参数检测。如果这项技术能够扩展到细胞分选，那么就可能使我们非常方便和精确地分选复杂的亚群。

2、Life Tehnologies的Attune NxT。这款流式细胞仪采用声波聚焦，与传统流式的鞘液聚焦相比，其获取速度更快、CV值更小。Attune Nxt最多可获取14种荧光参数，仪器小巧而强大。

3、ACEA（艾森）发布的NovoCyte。Novocyte也是一款小仪器，但配置不低，最高可达3激光13色，并且有体积定量功能，能够实现无需定量微球直接进行绝对计数。

4、Beckman Coulter的CytoFLEX。这款仪器最初由苏州赛景发明，后被Beckman收购。CytoFLEX有第二根405nm激光收购第二个SSC，从而在微颗粒的区分上更具优势，而且仪器采用了APD（Avalanche Photo Diode，雪崩光电二极管），而不是传统的PMT（光电倍增管）。

分选型流式细胞仪历来被认为是大而复杂的，不过以下几款分选仪给了我们不一样的新面貌：
1、Propel Avalon（现在叫Bio-Rad S3细胞分选仪）。仪器小巧并且易于使用。

2、Cytonome的Viva。单色桌面型分选仪，10万美元以下，适合分选GFP转染的细胞。

3、Miltenyi-Biotech的Tyto。基于微液流、分选盒可更换的新型流式分选仪，体积小巧，比较适合空间小的实验室，并且分选仪不使用电荷分选，可减少生物气溶胶的产生，避免生物危害。因为系统是低压、序贯分选，故一次只能分选一个群体。


二、试剂
荧光纳米晶体对于流式专业人员来说，有利有弊。从晶体大小来说，很难找到好的化学方法将其与生物标记物连接起来，但是偏偏这种晶体可以极大的扩展流式检测参数数量。这些年来，只有少数几个厂家可以生产。QuantaCyte的Trilite纳米晶体是纳米晶体市场上一种有意思的新事物，非常期待这种新染料与传统的Qdot、eFluor纳米晶体染料相比性能如何。

Sirigen研发的Brilliant Violet染料，市场上主要是Biolegend和Beckton-Dickenson两家在卖，目前来说还是十分不错的选择，其亮度更高、不存在纳米晶体的结合问题，并且扩大了荧光染料选择范围。随着荧光素进一步扩展到“Brilliant Ultraviolet”，流式专业人员有必要选择配有紫外激光的流式细胞仪了，在2015年，真正的18色流式细胞仪也会有可能逐渐进入市场。

流式细胞术另一个值得关注的领域就是RNA水平的检测。目前这方面有多家公司在开展，努力使mRNA水平的表型检测成为可能。 eBioscience的PrimeFlow RNA detection system和Advanced Cell Diagnostics RNAScope均值得密切关注。

三、软件
流式细胞术中最为繁琐和累人的就是方案设计：搜索抗体数据库、确定可用的抗原/荧光素组合、根据仪器选择。Fluorish 2.0是一个很强大的工具，可以帮助你设计流式方案，并且保存。Fluorofinder也是一个搜索和组合抗体的在线工具。这两个软件均对流式专业人员十分重要。

数据分析软件的改进和更新也值得关注，有些软件是由于PC操作系统的改变而改变，例如Beckman-Dickenson的DIVA 8。FlowJo则为了大数据的复杂分析而设计了很多功能。

Cytobank的最近版本，整合了viSNE和散点图的逐通道着色功能，均是对这个免费软件系统的一些引人注目的新式分析工具。对于CyTOF分析，Cytobank和SPADE平台仍然是质谱细胞术数据的主要工具。

DeNovo团队亦在继续努力开发FCS Express 5。从该版本软件的beta版测试用户反馈来看，此版本集成了统计学分析功能，这使得研究者可以无缝进行分析和统计学处理。

最后，Inivai开发的Flow Logic也是一个很不错的软件，在界面上与FlowJo类似。

结语：
竞争引发创新，对于终端用户是好处，可以给用户带来更快、更便宜、更易用的仪器、软件。我们期待2015年是美好的一年、创新的一年。

huikaimin

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yuemin5

质谱流式目前是个什么应用情况啊？感觉看上去很美，但是不知道目前在试剂选择上与传统流式有多大差距，会不会替代传统流式呢？

sunday

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niwanmao

yuemin5 发表于 2015-1-6 08:20
质谱流式目前是个什么应用情况啊？感觉看上去很美，但是不知道目前在试剂选择上与传统流式有多大差距，会不 ...

质谱流式目前应用应该还是很少，主要还是试剂的种类上面不够丰富，并且分析似乎和传统的流式有点不同。

可可菲

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Arcrain

质谱流式实际使用时存在一个门槛：样本制备难度高。另一个问题是，区分细胞亚群的能力还不如流式检测的荧光抗体标记。