标记在核酸上的CY5为何会结合于细胞表面？

Doctor-Lulu

最近做实验发现，将标记有CY5的基因转染进细胞，培养48小时后收集处理细胞测凋亡，根据对照组判断没有转进细胞内的基因粘附在细胞表面。标本上流式检测前洗涤了3次。请问，这种情况是否跟CY5荧光染料有关？

niwanmao

对照组应该是空转质粒的标本才对吧。有图或数据吗？

Doctor-Lulu

niwanmao 发表于 2015-1-14 10:25
对照组应该是空转质粒的标本才对吧。有图或数据吗？

有的，对照组没有加转染试剂。

niwanmao

Doctor-Lulu 发表于 2015-1-14 16:02
有的，对照组没有加转染试剂。

你的目的是不是为了检测CY5基因的转染效率？
那为什么不用空转质粒作为阴性对照，而是用CY5标记的基因去染细胞？

Smile14

niwanmao 发表于 2015-1-14 16:31
你的目的是不是为了检测CY5基因的转染效率？
那为什么不用空转质粒作为阴性对照，而是用CY5标记的基因去 ...

倪老师，这个问题我们也遇到了，我们这边的目的是为了看不同条件下携带Cy5的核酸被细胞内吞的比例，结果不加转染试剂组泡流式结果都是有很强的阳性，个人感觉和楼主描述是一样的。

niwanmao

Smile14 发表于 2021-3-16 20:55
倪老师，这个问题我们也遇到了，我们这边的目的是为了看不同条件下携带Cy5的核酸被细胞内吞的比例，结果 ...

楼主的实验好像是将CY5标记的核酸片段转染入细胞。
你这里是测试CY5标记的核酸内吞吗？转染的是无荧光标记的DNA片段吗？

zhji1231150260

Smile14 发表于 2021-3-16 20:55
倪老师，这个问题我们也遇到了，我们这边的目的是为了看不同条件下携带Cy5的核酸被细胞内吞的比例，结果 ...

说到内吞,我之前做siRNA内吞的时候,买的吉玛合成的Cy5标记的siRNA,没有用转染试剂,就游离的都吞进去了,所以后来换了FAM,基本都不吞

niwanmao

zhji1231150260 发表于 2021-3-17 12:00
说到内吞,我之前做siRNA内吞的时候,买的吉玛合成的Cy5标记的siRNA,没有用转染试剂,就游离的都吞进去了,所 ...

哦，看来是跟荧光素有关了

Smile14

niwanmao 发表于 2021-3-17 07:50
楼主的实验好像是将CY5标记的核酸片段转染入细胞。
你这里是测试CY5标记的核酸内吞吗？转染的是无荧光标 ...

转染的是RNA

Smile14

zhji1231150260 发表于 2021-3-17 12:00
说到内吞,我之前做siRNA内吞的时候,买的吉玛合成的Cy5标记的siRNA,没有用转染试剂,就游离的都吞进去了,所 ...

今天，我师兄又做了一次，做出了差异，还是Cy5，我也不太懂了；看了几篇文章都说Cy5标记RNA转细胞都会这样