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[其它临床检测] 流式CD3细胞还分强阳和弱阳两群?

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发表于 2015-8-6 22:05:08 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星未解决
本帖最后由 渡口小康仔 于 2015-9-6 22:03 编辑

大家好:
          最近做临床流式检测时发现,CD3阳性细胞会分为群,一群阳性强,一群阳性弱,而且有明显的个体差异。试剂所选用的就是普通的标准BD试剂,在CantoII和Calibur上都可以看到,结合物理图看像是一群为正常T细胞,一群为像异淋和一小部分的非特异染色。
也不知道具体原因,比较迷糊,希望得到大家解惑~


        不好意思了各位站友,最近一直有事,要不就是忘了,要不就是有事,拖了这么久也给大家汇报一下这事之后处理的结果。
        我们这边之前一直都是用Calibur做的,CantoII是今年才来的,算算时间正式运转应该在七月中旬左右。刚开始也就开始做新旧机的数据结果对比,因为是拿来做临床,所以做了大量的数据对比。

也就是在这个过程中发现了做B27时在CD3的阳性群出现两群,比较疑惑。刚开始的时候不正常的一群很少,但是还是能看到,但结果影响不大,判断中位数值的时候,圈上这一群的结果变化在10以内,该阴的还是阴该阳的还是阳。(早期的图忘弄了,回头再补上)

问题在一次试剂更换过后(都是BD标准的流式B27试剂盒,连批号都是一样的),做出来的图不正常的那一群全变多了,而且在个别样本里甚至影响到阴阳性,中位数的判定直接跨度到了10~70

圈两群

圈两群
                                             

圈正常群

圈正常群
      圈两群                                                                                                                      圈正常群


圈不正常的群

圈不正常的群
                                                P50831-151453.jpg
圈不正常的群                                                                                                      这是试剂说明书上的图


当我们把这批标本放到Calibur中来做后,也发现了问题(挑选出来的不是同一个样本)

1-1.png               出现了判定错误,在Calibur的物理图中看就比较清晰看到那一群不正常的群



我们重设模板分析了一下
1-2.png                                1-3.png

来一张判定正确的图做对比,都是在这一批样本中的:                            这是试剂说明书上的图:
2.png                                            P50831-151535.jpg




之后,又用了一个和这次做的同一批号的新试剂和新订的不同批号试剂作对比,不批号的maker变成149,之前的是147。又做了好多对比,上面的情况还是在之后的一周内发生,BD方面的也不知道这到底是怎么会事。
不过....................这些在两周后................又变了.............

差不多也就是困扰了这两周,查了各种文献,问了好多人,最后在没有什么结果的情况下。还是一样的试剂,一样的机器,一样的处理方法..............
图突然干净了.............. = =
P50831-151228.jpg                                         P50831-151355.jpg


虽然说不上和说明书上一样干净,但那一群都不知道是什么的细胞或碎片,变得几乎没有了..............


也不知道是试剂还是机器的适应性有问题,还是别的什么原因。在这里也希望有哪有位站友能够解惑!

PS:有一部分图是手机拍的,不太清楚,请原谅我的渣相机............= =


P50831-151453.jpg
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发表于 2015-8-7 08:47:22 | 显示全部楼层
别的标记有没有染?上图和数据吧?
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发表于 2015-8-7 11:02:24 | 显示全部楼层
我在体外刺激T细胞的时候,会见到TCR表达强和弱的两群细胞,可能跟你的情况一样。但不是每个个体都有这种情况的,就个别个体有,比较少见
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 楼主| 发表于 2015-8-9 12:07:33 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2015-8-7 08:47
别的标记有没有染?上图和数据吧?

就是做B27,图我工作日找找,很明显的两群还影响了最后的结果
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 楼主| 发表于 2015-8-9 12:09:17 | 显示全部楼层
小憨 发表于 2015-8-7 11:02
我在体外刺激T细胞的时候,会见到TCR表达强和弱的两群细胞,可能跟你的情况一样。但不是每个个体都有这种情 ...

哦,不一样,我的就是简单的临床项目,就是直接的免疫表型,没有什么刺激之类的处理
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发表于 2015-8-16 16:42:32 | 显示全部楼层
一般强的一群为TCRγδ T细胞,不表达CD4或CD8,略弱的一群为TCRαβ T细胞,表达CD4或CD8。前者与黏膜免疫相关
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 楼主| 发表于 2015-8-16 20:02:36 | 显示全部楼层
halolihui 发表于 2015-8-16 16:42
一般强的一群为TCRγδ T细胞,不表达CD4或CD8,略弱的一群为TCRαβ T细胞,表达CD4或CD8。前者与黏膜免疫 ...

那做B27的免疫表型,在最后判断结果的时候要加上这一群细胞吗?
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发表于 2015-8-16 23:06:37 | 显示全部楼层
我也发现了。不知什么原因,可能就是这样。
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发表于 2015-8-17 13:41:32 | 显示全部楼层
渡口小康仔 发表于 2015-8-16 20:02
那做B27的免疫表型,在最后判断结果的时候要加上这一群细胞吗?

α/β和γ/δ两类的CD3虽然有所差异,但不会相差很大,不会明显分成两群。并且正常情况下,都是以α/β群为主的。
关键还是要看你的散点图才能确定,不排除一些非特异性染色造成的可能。
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发表于 2015-8-17 14:28:13 | 显示全部楼层
上个图看一下,没刺激的一般不会有2群,估计染色或者补偿有问题
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