求神经干细胞流式检测NSC纯度的步骤

niwanmao

标题：求神经干细胞流式检测NSC纯度的步骤

求流式检测神经干细胞NSC纯度的步骤

细胞是悬浮培养的，要收集打散成单细胞然后后续固定，抗体孵育等步骤

之前做过几次，问题集中在1）细胞总是被洗掉      ；   2）阳性，阴性如何分析

我的步骤：体积不超过400μL，神经球收集消化打散成单细胞后

1）200μLPBS重悬，离心转速300 x g  5 minutes，  4℃

2）4%多聚甲醛冰上固定30min

3）200μLPBS洗一次  

4）冰上透化和一抗共同孵育45min(透化剂PBS配制0.1% (w/v) 皂素, 0.05% (w/v) NaN3 )

5）200μLPBS洗一次

6）400μLPBS重悬上机分析

因为没有得到理想的结果不好，后续的数据分析也没有做。希望能提供有效的好方法，并附图解析

不甚感谢

 

 

 

 

 

回答者：niwanmao

请提供下列信息：

1、你以前的处理步骤。

2、处理过程中的离心速度

阳性、阴性当然是根据同型对照进行设置Marker的。

2009年8月12日 0:54

chenbin

为什么这种，都不成熟的方案也要付费才能看？？？？？？似乎不太合理

niwanmao

chenbin 发表于 2012-08-04 19:01:06

                               
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为什么这种，都不成熟的方案也要付费才能看？？？？？？似乎不太合理

这是前年网站数据迁移时从旧平台转换过来的，默认都是加密1颗流星，无法人工一一审核，抱歉。现已把流星退还给你，请查收。

只要即时反馈，我们都会给以处理，不会乱收流星的，请放心。