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『一招鲜』区分凋亡和自噬

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发表于 2016-4-27 21:46:28 | 显示全部楼层 |阅读模式

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提示:这种方法不一定是最好的,但肯定有效并且有说服力。

凋亡和自噬都是细胞程序化死亡的一种方式,以前认为检测caspase-3活化可以提示凋亡,但是caspase-3活化也可出现在其它过程中,无法有效区分凋亡和自噬。其实,结合膜渗透性的改变、细胞膜表面PS的反转、线粒体膜电位降低这三个指标,可以比较可靠地区分出凋亡和自噬。
这三个指标当然可以分别用PI、Annexin V、JC-1等染料依次检测,但实际上我们可以借助DiOC6和PI两个染料,一次性检测膜渗透性和线粒体膜电位改变,并且进行功能学验证。

例如,我要做STS(staurosporine,星孢菌素)对人骨肉瘤细胞U2OS的作用,想了解这种药物对U2OS的作用究竟是通过诱导凋亡还是自噬,那么就可以简单做以下4组样本(如下图):
第一组,siUNR(空白对照的siRNA,作为第二组的空白对照)分别作用于空白细胞和加STS的细胞,用空白细胞设门,分析加STS细胞中活细胞的线粒体膜电位降低(PI-DiOC6 low的比例)
第二组,siATG5(针对ATG5的siRNA),分别作用于空白细胞和加STS细胞,因为siATG5可抑制自噬,所以通过观察PI-DiOC6 low的比例判断自噬在其中起到的作用如何。
第三组,单纯的空白和加STS药物细胞,同样检测PI-DiOC6 low的比例。
第四组,加Z-VAD-FMK,可抑制凋亡,同时作用于空白细胞和加STS药物的细胞,检测PI-DiOC6 low的比例变化,以判断凋亡在STS诱导细胞死亡中的作用如何。
屏幕快照 2016-04-27 下午8.41.48.jpg
从上图,很容易看的出来,用siATG5抑制自噬后,PI-DiOC6 low的比例几乎不变,而用Z-VAD-FMK抑制凋亡后,PI-DiOC6 low的比例明显降低,说明STS诱导U2OS细胞的作用机制是凋亡。


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