你知道定量流式细胞术的终级目标是什么？

niwanmao

流式细胞术有定性和定量之分，那么定量流式细胞术的终级目标是什么你知道吗？

大家可能只知道流式细胞术很强大，细胞核内、细胞浆内、细胞膜、血清/血浆中的都能测，但检测归检测，你是否知道流式细胞术分为定性和定量两类？说白了，临床上的免疫分型、MRD、淋巴细胞亚群、B27等检测，科研上的大多数项目（AV/PI测凋亡、PI测周期等），实际上均属于定性检测（Qualitative Flow Cytometry），因为关注的抗原的表达强弱或相对荧光强度，虽然很多项目最后报告的是细胞的比例或绝对数量。而定量流式细胞术（Quantitative Flow Cytometry）的概念则为需要以荧光定量微球参照，通过标准曲线，检测出绝对荧光强度。定性和定量两者无论是中文还是英文单词，均只差两个字节，但意义大为不同。定量流式细胞术对于标准化十分有用。

前两天微信后台有FLOWER问到ABC（Antibody Bound per Cell）是什么意思，这就牵涉到定量流式细胞术，故在此解释一下。顾名思义，ABC就是要检测每个细胞表面结合了多少量的抗原（亦即结合的抗体量），这个量需要绝对化，就能了解细胞表达抗原的绝对水平，而不需要我们苦苦寻找同型对照或者其它啥对照。所以，我们今天这篇文章的题目答案就是通过ABC确定细胞表面的抗原绝对数量或配体结合位点［1］。

要做好ABC，除了流式细胞仪的质控和补偿，还需要注意两点：
（1）验证和确定流式细胞仪的线性；
这一点在一些商品化流式细胞仪上均有对应的质控beads可用。
（2）用具有恒定CD4受体的生物质控品将线性的ERF（equivalent number of reference fluorophores， 等量参考荧光分子数量）转换为ABC值。
固定保存的正常全血标本上CD4分子约～45000，商品化的Cyto-Trol细胞上CD4分子～40000。

标准曲线将相对荧光强度转换为绝对数量

具体怎么做？我想在此也不细说了，大家看下面的protocol原文吧，免流星在线阅读PDF，并且支持划词翻译：
https://flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=attachment&aid=MTAzNDB8NDA3YTY4MzJ8MTc0MDQxNjQ3NXwwfA%3D%3D


参考文献：
1. Wang L, Degheidy H, Abbasi F, Mostowski H, Marti G, Bauer S, Hoffman RA, Gaigalas AK. Quantitative Flow Cytometry Measurements in Antibodies Bound per Cell Based on a CD4 Reference. Curr Protoc Cytom. 2016 Jan 6;75:1.29.1-1.29.14. doi: 10.1002/0471142956.cy0129s75.

niwanmao

feng238926 发表于 2018-11-5 17:28
倪老师，这种标定方式误差一般多少？

这跟机器的日常维护和性能有关。
如果能保证理想的状况：液路稳定、光路稳定，荧光定量微球也绝对没有问题，我估计这种CV应该会在5％以内。现实中大多在10％以内。

feng238926

倪老师，这种标定方式误差一般多少？

feng238926

niwanmao 发表于 2018-11-5 20:32
这跟机器的日常维护和性能有关。
如果能保证理想的状况：液路稳定、光路稳定，荧光定量微球也绝对没有问题 ...

效果还是蛮好的！