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[干祖细胞检测] 请各位伙伴和老师帮忙看下荧光衰减导致样本由阳变阴的...

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发表于 2016-11-15 00:09:44 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星未解决
本帖最后由 靠运气吃饭不好 于 2016-11-15 00:12 编辑

今天遇到一个病例:12岁 女 膝关节疼痛一年余,腰背痛半年,近日右手无力伴疼痛,临床申请做B27检测。
批量处理样本及上机检测,该样本检测mfi 140,检测者在检测完剩余样本后,测定b27校准微球后,再次上机检测,mfi变为118.
重新增加抗体量进行样本前处理,mfi测定207,15分钟后,180,10分钟后150,再过十分钟110,最终衰减到80,便再未进行测量。

考虑患者血浆中存在干扰物质影响抗体标记,PBS洗涤红细胞三次后按抗体标准量加样处理,间隔一定时间上机检测,结果如下图:

刚处理完样本上机

刚处理完样本上机



第一次上机后15min再次上机

第一次上机后15min再次上机



再次间隔十分钟上机

再次间隔十分钟上机



由于有第一次的经验,此次样本不检测时,均避光保存。

之前也试过同个样本分别于两日内检测,结果相当接近,不太明白,为什么这个样本,在十几分钟内荧光强度会剧烈衰减,请各位老师和同仁指点。

还有一点很奇怪,在之前按protocol,不洗涤细胞,直接标记抗体时,CD3+细胞只有两群,而洗涤后的样本,CD3出现三种强度的表达。

求教求教。(患者白细胞数及分类均正常)

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发表于 2016-11-15 10:17:42 | 显示全部楼层
能看看荧光值和时间的图吗?看看是不是仪器的原因,比如有一些影响PH值的东西在里面,同时有别的样本检测吗?是不是就是正常的
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发表于 2016-11-15 10:38:10 | 显示全部楼层
一个就是@chymanhz  站友说的仪器液流问题。另一个感觉是不是样本的细胞活力问题?
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 楼主| 发表于 2016-11-15 22:40:52 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2016-11-15 10:38
一个就是@chymanhz  站友说的仪器液流问题。另一个感觉是不是样本的细胞活力问题? ...

同时处理的样本有阴有阳,重复检测后,荧光值非常稳定,仪器也做了cst,并且冲洗了管路。
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 楼主| 发表于 2016-11-15 22:42:17 | 显示全部楼层
chymanhz 发表于 2016-11-15 10:17
能看看荧光值和时间的图吗?看看是不是仪器的原因,比如有一些影响PH值的东西在里面,同时有别的样本检测吗 ...

同时处理的样本有阴有阳,重复检测后,荧光值非常稳定,仪器也做了cst,并且冲洗了管路。
从第一张图到第三张,分别是制备后立即上机,十五分钟后,二十五分钟后的检测结果。
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发表于 2016-11-16 08:07:56 | 显示全部楼层
靠运气吃饭不好 发表于 2016-11-15 22:40
同时处理的样本有阴有阳,重复检测后,荧光值非常稳定,仪器也做了cst,并且冲洗了管路。 ...

我不知道你其它一些标本获取了多少细胞?这个样本的P2门只有200~300个细胞,我是觉得太少,而且活力是否好,也挺难说
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 楼主| 发表于 2016-11-16 22:49:03 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2016-11-16 08:07
我不知道你其它一些标本获取了多少细胞?这个样本的P2门只有200~300个细胞,我是觉得太少,而且活力是否 ...

获取10000和20000个细胞都尝试过,但是不影响结果的变化趋势,我看过您写的获取多少个细胞合适的公众号推送,因为还是初学者,水平不够,理解的不是很透彻。倪老师您有什么建议呢?
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发表于 2016-11-16 23:18:07 来自手机 | 显示全部楼层
靠运气吃饭不好 发表于 2016-11-16 22:49
获取10000和20000个细胞都尝试过,但是不影响结果的变化趋势,我看过您写的获取多少个细胞合适的公众号推 ...

主要是门内的细胞数更重要。不过每隔十分钟变化就这么大,而其他标本都没问题,我也实在想不出问题所在了,只能考虑标本原因了。建议下次这个病人标本来的时候,事先染一下pi看看细胞活力。
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 楼主| 发表于 2016-11-17 18:25:20 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2016-11-16 23:18
主要是门内的细胞数更重要。不过每隔十分钟变化就这么大,而其他标本都没问题,我也实在想不出问题所在了 ...

好的 谢谢您
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