精子DNA碎片用TUNEL检测，这里有个国外的标准化经验

niwanmao

TUNEL测定法可测量精子中的单链和双链DNA断裂，可以评估男性不育的必备指标。检测原理如下图：



但是通过流式细胞仪对TUNEL测定需要标准化。

为此，美国Cleveland Clinic生殖中心的Rakesh Sharma等人，组织了两个实验室之间的室间对比，目的是使用流式细胞仪标准化方案，并通过两个实验室之间的TUNEL测定来评估精子DNA断裂的重现性。

材料和方法：
使用相同的试剂盒Apo-Direct，使用相同批号、试验方案和试剂、流式细胞仪，由两个实验室分析来自31名患者的同一组精液样品。

分析设门方法：
首先选择精子，排除掉碎片，设为G1门。
然后选择PI＋的信号，就是有核酸的信号，进一步排除掉碎片和一些凋亡小体，设为G2门。
最后，对G2门内的信号分析其标记上的dUTP FITC的百分比，下面d图是实验标本，e图是阳性对照。


结果：
实验室队列1的结果为：r = 0.891; p = 0.001;队列2：r = 0.745; p = 0.012和队列3：r = 0.709; P = 0.028。两组实验室的实验室平均值和阳性对照组在队列2和3组合（r = 0.773; p <0.001和r = 0.839; p <0.001）之间也高度相关。

结论：
​TUNEL测定的结果在实验室内和跨实验室都具有很高的可重复性。通过独立实验室对标准化方案的进一步验证对于将该测定建立为生育中心的高级诊断测试是重要的。

具体的实验操作方法，请点击“在线阅读”图标，在线阅读，无需下载，并支持划词翻译。
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