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[标本处理] FasL检测

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发表于 2018-4-15 21:01:33 | 显示全部楼层 |阅读模式
5流星
有染过CD8+T细胞上FasL的小伙伴吗?请教一下哪种克隆的抗体好,另外有没有protocol可以指导一下具体操作。多谢!

发表于 2018-4-17 08:44:27 | 显示全部楼层
检测人的还是检测小鼠的?
 楼主| 发表于 2018-4-17 16:05:52 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2018-4-17 08:44
检测人的还是检测小鼠的?

Human CD8+ T cells from PBMC negative isolation
发表于 2018-4-18 19:28:18 | 显示全部楼层
jiezhuaph 发表于 2018-4-17 16:05
Human CD8+ T cells from PBMC negative isolation

FasL就是CD178,表达在细胞表面,所以很好做。
你可以将CD3、CD8、CD178一起标记,然后分析CD3+CD8+表面的CD178表达即可。至于克隆号,从发表文章看,NOK-1克隆号似乎引用量稍微高一点。
 楼主| 发表于 2018-4-19 22:22:52 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2018-4-18 19:28
FasL就是CD178,表达在细胞表面,所以很好做。
你可以将CD3、CD8、CD178一起标记,然后分析CD3+CD8+表面 ...

谢谢!标记了CD3,CD8,CD178NOK-1克隆,但CD178信号看上去比较弱,阳性信号不到10*3 ,CD8是用CD3/CD28 beads刺激了48小时后的
发表于 2018-4-20 07:52:37 | 显示全部楼层
jiezhuaph 发表于 2018-4-19 22:22
谢谢!标记了CD3,CD8,CD178NOK-1克隆,但CD178信号看上去比较弱,阳性信号不到10*3 ,CD8是用CD3/CD28  ...

从文献数据、抗体说明书的数据来看,确实是偏弱的,不分群,所以做好阴性参照很重要,建议对照管和实验管均进行Fc阻断后,对照管用CD3、CD8做一管FMO对照,这样分析会比较准确。
发表于 2018-4-21 09:07:13 | 显示全部楼层
FasL表达水平本身就很弱(要是高表达,细胞还活不活了?)。除了细胞表面,FasL也存在于细胞质中(所以,理论上,信号弱的话可以尝试一下胞内染色。我没做过!)。活化的T细胞FasL表达量会增加。细胞与metalloprotease抑制剂共孵育,可以抑制FasL的剪切,增加其在细胞表面的水平。
 楼主| 发表于 2018-4-21 19:13:13 | 显示全部楼层
Arcrain 发表于 2018-4-21 09:07
FasL表达水平本身就很弱(要是高表达,细胞还活不活了?)。除了细胞表面,FasL也存在于细胞质中(所以,理 ...

我也想到了,细胞打了孔后,再测发现有一点shift,加抑制剂还没试
发表于 2018-4-22 16:13:50 | 显示全部楼层
jiezhuaph 发表于 2018-4-21 19:13
我也想到了,细胞打了孔后,再测发现有一点shift,加抑制剂还没试

破膜后,都会发生偏移的,不一定是真正的增高,需注意做好我前面提到的对照
 楼主| 发表于 2018-4-24 14:59:42 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2018-4-22 16:13
破膜后,都会发生偏移的,不一定是真正的增高,需注意做好我前面提到的对照 ...

不打孔,加靶细胞刺激CD8表达FASL可不可以?
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