PI单染检测细胞存活率

huxiaozhou

流式小白最近在用PI单染法检测细胞存活率，有很多问题不明白，请大神指导。
1：我们这边机子（型号：美天旎 MACSQuant 流式细胞仪）要求上机细胞术为50万-100万，在网上搜索有提到大于10万就好，请问这个细胞数有严格要求吗？另外，我的每个样品的细胞浓度均有一定差异，请问可以通过操作时设置相关参数使检测的各样品的细胞数达到一致吗？
2：在做单标时，如何根据所出的图形判断需不需要调节补偿？
3：在检测样品之前，我要做空白组和PI单标组调节电压，调整好的参数保存方法用于后面样品的测试，如果发现检测样品时电压不合适，还可以做相应调节吗?这样会影响实验结果的一致性吗？如何可以调节，之前的空白组和PI单标组设置参数是不是就显得没意义了。
4：直方图中选择PI阳性群时横坐标截取位置的依据是什么？是依据空白组吗？
5：加入PI染液的量是不是需要根据细胞悬液的体积定呢？凋亡试剂盒说明书中提到，500uLbinding buffer 加5uL的PI染料，那如果体积缩小，相应的PI加入体积也缩小吧？
6：PI的激发波长和发射波长分别是535 nm和615 nm，请问这个参数对流式实验的参考意义在哪里？
先提前感谢大家的解答，谢谢！

niwanmao

1、上机细胞总数无严格要求，但一般最好目标门内细胞数1万以上。对于美天旎机器不熟，其它机器可通过设置门内数量作为停止条件来使得最终目标细胞数一致。
2、补偿的问题，请搜索站内“补偿”，在此不详述。
3、正常情况下，样本之间无特殊因素导致差异的话，条件是通用的，如果变化很大，需要排除两种可能性：一是液路不稳定，二是样本处理因素影响样本太明显。此时可不调节，仅需在分析时进行微调。
4、PI阳性和阴性的分群位置非常明显，分得如此清楚，还需要空白？
5、建议关注PI终浓度，所以根据体积适当增减用量是对的。
6、波长是给你选择通道使用的。
最后，请发帖时选择正确的提问版块，而不是发在资料分享版块。下不为例，谢谢！

huxiaozhou

niwanmao 发表于 2018-4-22 16:10
1、上机细胞总数无严格要求，但一般最好目标门内细胞数1万以上。对于美天旎机器不熟，其它机器可通过设置门 ...

嗯嗯，多谢老师指导和提醒