目的细胞群的圈门问题

onlytime · 发表于 2018-6-25 21:10:21

各位老师好！最近用凯基公司annexin v-FITC/PI试剂盒检测药物处理后细胞的凋亡情况，是hepg2贴壁细胞，仪器是BD FACSVerse。设有以下分组：

BLANK组（无药物，未染色）；

annexin v-FITC单染组；PI单染组；

实验对照组（无药物，双染）；实验组（药物处理，双染）

按照试剂盒说明书收集细胞并染色后上机检测，先用BLANK组细胞调节FSC/SSC的电压，在FSC-A/FSC-H中排除黏连细胞后，用FSC-A/SSC-A圈细胞群，调节FITC和PI的电压使细胞位于FITC/PI图中右下象限；

然后用两个单染管调节补偿（annexin v-FITC减了50）；

最后检测实验对照组和实验组

想请教各位老师检测过程是对的吗？FSC/SSC、FITC、PI的电压是都用BLANK组调节的吗？单阳管可以调annexin v-FITC、PI的电压吗？

在FSC-A/SSC-A里细胞分群很奇怪，不知道要圈哪群细胞才对，想请各位老师帮忙看看，谢谢各位了！

niwanmao · 发表于 2018-6-26 10:20:48

Annexin V/PI的图呢？
右侧FSC/SSC散点图设置为只显示singlets

onlytime · 发表于 2018-6-26 20:34:57

niwanmao 发表于 2018-6-26 10:20
Annexin V/PI的图呢？
右侧FSC/SSC散点图设置为只显示singlets

倪老师，这是我今天刚检测的，但是感觉Annexin+/PI+的细胞太少了，而Annexin+/PI-的没有跟Annexin-/PI-的细胞分开

niwanmao · 发表于 2018-6-26 21:40:48

onlytime 发表于 2018-6-26 20:34
倪老师，这是我今天刚检测的，但是感觉Annexin+/PI+的细胞太少了，而Annexin+/PI-的没有跟Annexin-/PI-的 ...

这么圈圈看

onlytime · 发表于 2018-6-27 10:35:36

倪老师，这是分别圈门后的图，麻烦老师帮忙分析下，谢谢老师！

onlytime · 发表于 2018-6-27 21:05:39

niwanmao 发表于 2018-6-26 21:40
这么圈圈看

倪老师，这是分别圈门后的图，麻烦老师帮忙分析下，谢谢老师！@niwanmao

niwanmao · 发表于 2018-6-28 13:23:02

onlytime 发表于 2018-6-27 10:35
倪老师，这是分别圈门后的图，麻烦老师帮忙分析下，谢谢老师！

看来还是需要把FSC/SSC所有细胞圈进去，有必要

ghqiu09 · 发表于 2018-6-28 13:57:52

你在收集细胞前光镜下观察细胞吗？感觉Blank的细胞都有点死的样子，还有FSC-A压线的细胞还有很多，你有看过那个团的A/P情况吗？会不会那个团才是你要的细胞？

onlytime · 发表于 2018-7-3 15:19:05

ghqiu09 发表于 2018-6-28 13:57
你在收集细胞前光镜下观察细胞吗？感觉Blank的细胞都有点死的样子，还有FSC-A压线的细胞还有很多，你有看过 ...

收集前都有看过细胞状态的，BLANK组状态都挺好，可能是消化处理损伤太大了。您所说的另外一团细胞是指哪一部分啊？

onlytime · 发表于 2018-7-3 15:20:09

niwanmao 发表于 2018-6-28 13:23
看来还是需要把FSC/SSC所有细胞圈进去，有必要

但是全部全进去整个图很奇怪呢

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[凋亡检测] 目的细胞群的圈门问题