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[其它] 流式检测血小板活化及其与各类白细胞之间的相互作用

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发表于 2018-9-5 19:11:43 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
各位老师们好,新手上路有几个问题,想请教一下,我最近在做一个全血染血小板,检测血小板聚集及其与各类白细胞之间的相互作用,看激动剂(ADP)使用前后,看不同组病人和正常人之间的差异,因为实验室目前没有人做过血小板的流式,所以条件什么的都是参照文献,和之前我在我们流式中文网上找到的一些方案,然后圈门什么的是师兄按照他习惯的圈外周血三个白细胞亚群来的,但是我现在有点困惑,因为我按照protocol来,并不能找到10^2-10^3直接的血小板群体,后来我就用CD41反圈才找到对应的血小板,想请教下我目前的染色图可以吗?(抗体:biolegend公司的Percp/Cy5.5-CD62P,BV510 CD41,FITC-CD42b,步骤:取全血100ul+2ul抗体(上述三种抗体各2ul)室温染色15min,2%多聚甲醛固定15min,裂红10分钟,两次洗涤后加200ulTyrode‘s buffer重悬上机检测)
各位老师走过路过的快来救救孩子吧,因为没有人指导我也不知道自己做的到底对不对

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 楼主| 发表于 2018-9-8 21:07:21 | 显示全部楼层
自己顶希望有大大可以回复一下
发表于 2018-9-10 08:46:13 | 显示全部楼层
血小板非常小,所以需要将FSC和SSC坐标均调节为Log才行。
 楼主| 发表于 2018-9-22 10:04:43 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2018-9-10 08:46
血小板非常小,所以需要将FSC和SSC坐标均调节为Log才行。

谢谢大大回复!我有尝试过用log来调,但是这样子的话就没有血小板了,所有的细胞群都集中则在右侧,然后我就只能通过反圈来确定血小板在FSC和SSC中在哪个位置
发表于 2018-9-22 10:39:56 | 显示全部楼层
jqr946 发表于 2018-9-22 10:04
谢谢大大回复!我有尝试过用log来调,但是这样子的话就没有血小板了,所有的细胞群都集中则在右侧,然后我 ...

如果在Log坐标下超出,可以将电压调下来,使血小板群位置在散点图中间部分比较合适。
 楼主| 发表于 2018-9-24 10:09:25 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2018-9-22 10:39
如果在Log坐标下超出,可以将电压调下来,使血小板群位置在散点图中间部分比较合适。 ...

好的,谢谢大大!我下周再试试看
发表于 2018-9-25 11:06:00 | 显示全部楼层
jqr946 发表于 2018-9-24 10:09
好的,谢谢大大!我下周再试试看

你把坐标改为log后用双指数显示看看
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