CFSE能否做多色？？

niwanmao

特别懒的小豹子 发表于 2021-11-2 12:25
想问楼主解决了吗，我用BV510标记细胞，发现跟CFSE之间补偿好几百，CFSE电压280 ...

前面提供了两个解决方案：
1、减少CFSE用量，使CFSE荧光弱一些。
2、用8楼的替代的荧光增殖染料

特别懒的小豹子

请教下倪老师，我用CFSE标记A细胞，再和无荧光标记的B细胞共培养1周后看A细胞的增殖情况（A细胞分A1,A2两个亚群）。我的步骤是不是应该是，day0时，A细胞和B细胞混合后标记系列抗原Marker，确定FITC(CFSE)电压不超过5次方，然后day7时，再上各个组细胞流式，方法同day0    （目前day0，我用的流式抗体有：PE-Cy7 CD3，BV510 αβ，Pacific blue-Vδ2，CFSE），发现BV510-FITC之间补偿400.。。。然后细胞亚群位置也不对（γδ细胞亚群变成BV510全阳性，应该是阴性的）

特别懒的小豹子

niwanmao 发表于 2021-11-2 12:50
前面提供了两个解决方案：
1、减少CFSE用量，使CFSE荧光弱一些。
2、用8楼的替代的荧光增殖染料 ...

谢谢倪老师，请教下，我用CFSE标记A细胞，再和无荧光标记的B细胞共培养1周后看A细胞的增殖情况（A细胞分A1,A2两个亚群）。我的步骤是不是应该是，day0时，A细胞和B细胞混合后标记系列抗原Marker，确定FITC(CFSE)电压不超过5次方，然后day7时，再上各个组细胞流式，方法同day0    （目前day0，我用的流式抗体有：PE-Cy7 CD3，BV510 αβ，Pacific blue-Vδ2，CFSE），发现BV510-FITC之间补偿400.。。。然后细胞亚群位置也不对（γδ细胞亚群变成BV510全阳性，应该是阴性的）

niwanmao

特别懒的小豹子 发表于 2021-11-2 13:04
谢谢倪老师，请教下，我用CFSE标记A细胞，再和无荧光标记的B细胞共培养1周后看A细胞的增殖情况（A细胞分 ...

CFSE紫光和紫外波段也可激发，所以可考虑用8楼的替代染料试试。

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用cfse单染管，看看对其他所有通道spread有多大，选择没什么影响的通道，加348