用CD45RA/CCR7/CD45RO/CD62L分子鉴定正常人外周血PBMC中各亚型T...

Janexuan

各位老师大家好！本人小白用CD45RA+CCR7组合，及CD45RA+CD62L组合，CD45R0+CD62L组合，分别鉴定外周血T细胞中各初始T细胞，中枢记忆T细胞，效应记忆T细胞，效应T 细胞的比例，发现各种不同的组合标记分子，标记的各T细胞亚型不一致。查阅相关文献得知，这几种搭配方式均可，到底用哪一种组合方式才更能准确反应出外周血中各T细胞亚型的占比呢？

Janexuan

流式结果图 如下所示：
流式染色方案：
S1   空白对照
S2  同型对照   CD3-BV510,CD4-Percp cy5.5,CD8-Alex700,CD45RA的同型对照，CCR7的同型对照
S3 样本（冻存过后的正常人外周血PBMC） CD3-BV510,CD4-Percp cy5.5,CD8-Alex700,CD45RA-BV786,CCR7-BV605

只帆片影110

目测第一个组合效果不错

niwanmao

Janexuan 发表于 2019-1-20 19:17
流式结果图 如下所示：
流式染色方案：
S1   空白对照

我们平时用CD45RA和CCR7，用全血。那个图里面的设门需往右移

mybiosciences

类似组合好像还有很多，如果仪器通道多的话，可以把这些组合的抗体放在不同通道，可能会有不同的结果，到时和大家分享一下

Janexuan

对对 查了很多文献，上面提及的各种组合都有用于区分Tn,Tcm,Tem,Te,但采取不同的组合分析同一样本，差别挺大，我想可能跟抗体的克隆号和同型对照圈门都有关系吧，谢谢各位老师的解答！

Janexuan

niwanmao 发表于 2019-1-21 10:24
我们平时用CD45RA和CCR7，用全血。那个图里面的设门需往右移

老师，您说的是组合三吗？我圈门是按照对应的同型对照，将其他三个象限的百分比控制在1%以内所圈定的门。那这种依照同型对照圈门，应该以什么规则划定才最准确呢？

niwanmao

Janexuan 发表于 2019-1-28 16:13
老师，您说的是组合三吗？我圈门是按照对应的同型对照，将其他三个象限的百分比控制在1%以内所圈定的门。 ...

是组合三，不是按照同型，而是按照分群。同型之前多个帖子强调过，基本上都选不对的。

yuan743561169

niwanmao 发表于 2019-1-21 10:24
我们平时用CD45RA和CCR7，用全血。那个图里面的设门需往右移

倪老师，请问一下，如果用CD45RA和CCR7组合的话，分群如下：CD45RA⁺CCR7⁺初始T细胞，CD45RA^-CCR7⁺中央型记忆细胞,CD45RA^-CCR7^-效应型记忆细胞；对吗？
我见文献有如下组合：CD45RA⁺CCR7⁺CD62L^high初始T细胞，CD45RO⁺CCR7⁺CD62L^high中央型记忆细胞，CD45RO⁺CCR7^-CD62L^low效应型记忆细胞，如果排除仪器荧光通道数限制的话是不是第二种更好呢？

niwanmao

yuan743561169 发表于 2019-1-29 10:29
倪老师，请问一下，如果用CD45RA和CCR7组合的话，分群如下：CD45RACCR7初始T细胞，CD45RACCR7中央型记忆 ...

如下图设门：


如果能加上更多标记，当然更好，但是在逻辑上需要理清楚。