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[淋巴细胞相关] 用CD45RA/CCR7/CD45RO/CD62L分子鉴定正常人外周血PBMC中各亚型T...

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发表于 2019-1-20 19:13:40 | 显示全部楼层 |阅读模式
2流星
各位老师大家好!本人小白用CD45RA+CCR7组合,及CD45RA+CD62L组合,CD45R0+CD62L组合,分别鉴定外周血T细胞中各初始T细胞,中枢记忆T细胞,效应记忆T细胞,效应T 细胞的比例,发现各种不同的组合标记分子,标记的各T细胞亚型不一致。查阅相关文献得知,这几种搭配方式均可,到底用哪一种组合方式才更能准确反应出外周血中各T细胞亚型的占比呢?

 楼主| 发表于 2019-1-20 19:17:47 | 显示全部楼层
流式结果图 如下所示:
流式染色方案:
S1   空白对照
S2  同型对照   CD3-BV510,CD4-Percp cy5.5,CD8-Alex700,CD45RA的同型对照,CCR7的同型对照
S3 样本(冻存过后的正常人外周血PBMC) CD3-BV510,CD4-Percp cy5.5,CD8-Alex700,CD45RA-BV786,CCR7-BV605
1.png
2.png
发表于 2019-1-20 22:27:20 | 显示全部楼层
目测第一个组合效果不错
发表于 2019-1-21 10:24:52 | 显示全部楼层
Janexuan 发表于 2019-1-20 19:17
流式结果图 如下所示:
流式染色方案:
S1   空白对照

我们平时用CD45RA和CCR7,用全血。那个图里面的设门需往右移
发表于 2019-1-25 23:56:40 | 显示全部楼层
类似组合好像还有很多,如果仪器通道多的话,可以把这些组合的抗体放在不同通道,可能会有不同的结果,到时和大家分享一下
 楼主| 发表于 2019-1-28 16:10:01 | 显示全部楼层
对对 查了很多文献,上面提及的各种组合都有用于区分Tn,Tcm,Tem,Te,但采取不同的组合分析同一样本,差别挺大,我想可能跟抗体的克隆号和同型对照圈门都有关系吧,谢谢各位老师的解答!
 楼主| 发表于 2019-1-28 16:13:46 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-1-21 10:24
我们平时用CD45RA和CCR7,用全血。那个图里面的设门需往右移

老师,您说的是组合三吗?我圈门是按照对应的同型对照,将其他三个象限的百分比控制在1%以内所圈定的门。那这种依照同型对照圈门,应该以什么规则划定才最准确呢?
发表于 2019-1-29 10:12:14 | 显示全部楼层
Janexuan 发表于 2019-1-28 16:13
老师,您说的是组合三吗?我圈门是按照对应的同型对照,将其他三个象限的百分比控制在1%以内所圈定的门。 ...

是组合三,不是按照同型,而是按照分群。同型之前多个帖子强调过,基本上都选不对的。
发表于 2019-1-29 10:29:46 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-1-21 10:24
我们平时用CD45RA和CCR7,用全血。那个图里面的设门需往右移

倪老师,请问一下,如果用CD45RA和CCR7组合的话,分群如下:CD45RA+CCR7+初始T细胞,CD45RA-CCR7+中央型记忆细胞,CD45RA-CCR7-效应型记忆细胞;对吗?
我见文献有如下组合:CD45RA+CCR7+CD62Lhigh初始T细胞,CD45RO+CCR7+CD62Lhigh中央型记忆细胞,CD45RO+CCR7-CD62Llow效应型记忆细胞,如果排除仪器荧光通道数限制的话是不是第二种更好呢?
发表于 2019-1-29 11:15:53 | 显示全部楼层
yuan743561169 发表于 2019-1-29 10:29
倪老师,请问一下,如果用CD45RA和CCR7组合的话,分群如下:CD45RACCR7初始T细胞,CD45RACCR7中央型记忆 ...

如下图设门:
屏幕快照 2019-01-29 上午11.14.25.png

如果能加上更多标记,当然更好,但是在逻辑上需要理清楚。
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