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[标本处理] 结肠固有淋巴细胞的treg细胞染色问题

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发表于 2019-4-13 20:16:57 | 显示全部楼层 |阅读模式
20流星
各位老师好,最近我做结肠固有淋巴细胞的流式测treg细胞含量。通过剪碎BALB/C小鼠结肠组织,消化酶消化后,40um的滤膜滤过获得单细胞悬液。然后使用不同浓度percoll离心20分钟,获取中间层淋巴细胞。通过孵育方法,标记表面抗体cd4,cd25,固定破膜后,标记foxp3。但是cd4,cd25始终染色不上。请问是固定破膜问题,还是消化酶的影响呢?结果如图,谢谢老师~

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发表于 7 天前 | 显示全部楼层
确实都没染上。
小细胞那里的表达如何?三管的分组情况如何。
另外,这些抗体是否都买对了?
 楼主| 发表于 7 天前 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-4-14 11:36
确实都没染上。
小细胞那里的表达如何?三管的分组情况如何。
另外,这些抗体是否都买对了? ...

老师好,三管都是预实验。都是正常小鼠的结肠组织~小细胞指的是?买的是bd公司小鼠的抗体~
 楼主| 发表于 7 天前 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-4-14 11:36
确实都没染上。
小细胞那里的表达如何?三管的分组情况如何。
另外,这些抗体是否都买对了? ...

这个是我订的cd4抗体~
Screenshot_20190414_122458_com.tencent.mtt.jpg
发表于 7 天前 | 显示全部楼层
chenmj363 发表于 2019-4-14 12:19
老师好,三管都是预实验。都是正常小鼠的结肠组织~小细胞指的是?买的是bd公司小鼠的抗体~ ...

小细胞指的是你圈的这些细胞左边那些,那些是否有CD3+细胞?
 楼主| 发表于 7 天前 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-4-14 13:38
小细胞指的是你圈的这些细胞左边那些,那些是否有CD3+细胞?

好的,我明天去问问流式老师~
 楼主| 发表于 7 天前 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-4-14 13:38
小细胞指的是你圈的这些细胞左边那些,那些是否有CD3+细胞?

老师,如果小细胞区域有染色,会是什么原因呢~
发表于 7 天前 | 显示全部楼层
chenmj363 发表于 2019-4-14 15:48
老师,如果小细胞区域有染色,会是什么原因呢~

如果小细胞有,说明圈门圈错了。
如果都没有,说明确实没染上。抗体出问题的概率偏低,可能需从细胞制备上找问题。
 楼主| 发表于 6 天前 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-4-14 13:38
小细胞指的是你圈的这些细胞左边那些,那些是否有CD3+细胞?

老师好,我把区域调节到淋巴细胞区域,可以看到cd4,cd25的染色情况,但是从图中判断染色情况不是特别理想~
Screenshot_20190415_160602.jpg
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发表于 6 天前 | 显示全部楼层
chenmj363 发表于 2019-4-15 16:07
老师好,我把区域调节到淋巴细胞区域,可以看到cd4,cd25的染色情况,但是从图中判断染色情况不是特别理想 ...

不要用percoll分离,加CD45,用CD45圈淋巴细胞。
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