查看: 357|回复: 8
收起左侧

[结构和原理] 电压对阴性群的影响很大,为什么?

[复制链接]
发表于 2019-6-5 09:14:23 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
微信图片_20190604125023.png 这三个图分别是在不同的电压下blank,和样本细胞群的图,有一个问题,为什么样本的阴性群荧光强度会随电压升高而升高,而blank位置,不会变,ISO之前也做过也是一样。

发表于 2019-6-5 16:06:43 | 显示全部楼层
blank还是有变化的,只不过因为你一点抗体都没有加,所以本底低。
 楼主| 发表于 2019-6-11 09:31:18 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-6-5 16:06
blank还是有变化的,只不过因为你一点抗体都没有加,所以本底低。

谢谢倪老师,但其实我关注的是样本的阴性群,既然没有与抗体结合,就应该没有荧光信号,有的只是细胞的本底信号,那为什么荧光信号会随着电压的升高而升高,原理我想不明白。
发表于 2019-6-11 11:19:38 | 显示全部楼层
特勒兮兮 发表于 2019-6-11 09:31
谢谢倪老师,但其实我关注的是样本的阴性群,既然没有与抗体结合,就应该没有荧光信号,有的只是细胞的本 ...

本底信号在机器眼里,跟荧光有差别吗?
就像你在电脑上运行可执行文件和看Word文档,你看上去不一样,但在机器眼里都是0和1
 楼主| 发表于 2019-6-11 13:04:10 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-6-11 11:19
本底信号在机器眼里,跟荧光有差别吗?
就像你在电脑上运行可执行文件和看Word文档,你看上去不一样,但 ...

是的,没有区别,我的点是   ,为什么样本的阴性群荧光信号会随电压的升高而明显升高,但是blank不会,ISO也不会,因为理论上blank、ISO和阴性群未结合抗体,都应该只有本底信号!!!
我纠结于这个问题的原因就是,有些Marker分群极其不清晰,低电压的时候测出来跟ISO没有区别,但是增高电压之后它又会明显往阳性区偏移,但ISO不会,所以这个时候就难鉴定它到底有没有阳性。。。
发表于 2019-6-12 10:25:09 | 显示全部楼层
特勒兮兮 发表于 2019-6-11 13:04
是的,没有区别,我的点是   ,为什么样本的阴性群荧光信号会随电压的升高而明显升高,但是blank不会,IS ...

你还是没理解,blank和iso,上面压根就没结合任何抗体,电压调节之后,变化当然轻微。
至于标记的,你看到的阴性群,上面可不一定完全没结合抗体哦,可能结合了10个抗体分子,可能结合了20个,但没跑出你设置的阴阳性分界。当调节电压到足够大,他们还是可以与真正的阴性拉开一点差距,于是就看到“阴性”群拉宽了。
所以,这就涉及到电压合理性,也是为什么我们一直强调电压要在合理的范围之内。
 楼主| 发表于 2019-6-12 11:03:45 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-6-12 10:25
你还是没理解,blank和iso,上面压根就没结合任何抗体,电压调节之后,变化当然轻微。
至于标记的,你看 ...

您的意思我懂了,但是还是有问题就是,比如第三幅图,这个电压是很大的,如果以blank进行划门,那么blank右边的都是有结合的是不,不管结合多少,那么这个样本的真实阳性率就不是17.91%了,而是更高;
 楼主| 发表于 2019-6-12 11:05:46 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-6-12 10:25
你还是没理解,blank和iso,上面压根就没结合任何抗体,电压调节之后,变化当然轻微。
至于标记的,你看 ...

我不钻了,我感觉看了您的解释,我更凌乱了
发表于 2019-6-12 15:41:56 | 显示全部楼层
特勒兮兮 发表于 2019-6-12 11:03
您的意思我懂了,但是还是有问题就是,比如第三幅图,这个电压是很大的,如果以blank进行划门,那么blank ...

设门,本就不应该以blank和isotype设门的呀,这个之前很多帖子里面强调过了(请搜索同型对照关键词)。
正确的设门参照,最理想的是生物学阴性对照,其次是Fc阻断之后的FMO对照。
您需要登录后才可以回帖 登录 | 加入流式中文网

本版积分规则

流式中文网    

联系我们: mail#flowcyto.cn (#改为@)

GMT+8, 2019-9-15 21:56

Powered by Discuz! X3.2

© 2001-2013 Comsenz Inc.