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[标本处理] 细胞凋亡的分析

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发表于 2019-7-8 17:19:20 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
各位老师,日前做了细胞凋亡实验共3组各3复孔(2个处理组+1对照组),流式图出来和之前不一样,细胞普遍都集中在双阳区(Q2),请看下作图处理是否有问题FSC-A,FSC-H去黏连是否正确?此外对于同组复孔,有的Q2群特别宽,请问是什么原因?
NC-1.png NC-2.png NC-3.png SiC-1.png SiC-2.png SiC-3.png SiM-1.png SiM-2.png SiM-3.png



发表于 2019-7-8 21:22:44 | 显示全部楼层
你这里要关注的不是粘连问题,而是为什么Annexin V和PI双阳这么高
 楼主| 发表于 2019-7-9 08:38:41 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-7-8 21:22
你这里要关注的不是粘连问题,而是为什么Annexin V和PI双阳这么高

我也很奇怪,请问倪老师,一般情况下双阳性这么高会什么原因?有哪些情况会造成假阳性?
发表于 2019-7-9 09:08:54 | 显示全部楼层
乖乖的萱仔 发表于 2019-7-9 08:38
我也很奇怪,请问倪老师,一般情况下双阳性这么高会什么原因?有哪些情况会造成假阳性? ...

请把你样品制备过程说一下,尤其是染色前的过程。
 楼主| 发表于 2019-7-9 10:07:20 | 显示全部楼层
tiger 发表于 2019-7-9 09:08
请把你样品制备过程说一下,尤其是染色前的过程。

培养基各自吸到管子里,pbs洗,洗后的废液收集到同一管子里,消化,终止消化,再次收集到同一管子里,800r,5分钟离心,弃掉上清,加200u 1x 缓冲液,上机前15分钟加了染料
发表于 2019-7-9 11:00:12 | 显示全部楼层
乖乖的萱仔 发表于 2019-7-9 10:07
培养基各自吸到管子里,pbs洗,洗后的废液收集到同一管子里,消化,终止消化,再次收集到同一管子里,800 ...

消化是问题关键,贴壁细胞不是非常适合做Annexin V/PI,特别容易产生假阳性。
 楼主| 发表于 2019-7-9 11:31:55 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-7-9 11:00
消化是问题关键,贴壁细胞不是非常适合做Annexin V/PI,特别容易产生假阳性。 ...

1.请问贴壁细胞一般用什么办法测凋亡比较好?
2.Annexin法是不是只适合分析早期凋亡的精确性高一点,如果早期+晚期是不是会增大误差,因为双阳区会存在死细胞?
发表于 2019-7-9 12:45:34 | 显示全部楼层
乖乖的萱仔 发表于 2019-7-9 11:31
1.请问贴壁细胞一般用什么办法测凋亡比较好?
2.Annexin法是不是只适合分析早期凋亡的精确性高一点,如果 ...

细胞处理上没什么问题,你再仔细观察一下,细胞是不是长过了。所以阴性对照组也有大量的坏死细胞
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