细胞周期步骤问题

duanyt

我从单个核细胞加细胞因子培养巨核细胞。目前巨核的比例大概有15%。我想检测一下巨核细胞的倍体，看看4N以上的比例多少。但是如果直接用PI染色的话，做的就是所有细胞的周期。所以我想先加CD41抗体，然后用冰乙醇固定，然后用PI染色。不知道这样做可行不可行（我只想要巨核细胞的倍体结果，不想要其他细胞的）。或者能不能先固定，然后再加CD41和PI。请指教。

niwanmao

建议可以使用7-AAD这个染料来做。

材料：
1、荧光标记的抗体（例如你这里需要的CD41）
2、细胞
3、7-AAD/皂素溶液： 0.03%皂素， 25µg/ml 7-AAD，1% BSA。也可用PBS或10mM HEPES配制。

具体操作步骤如下（注意：这个protocol不能用在GFP标记的细胞。）：
最好同时做一管不加荧光抗体的。
1、收集细胞，按照正常步骤标记表面荧光抗体（在BD的机器上，可以选择除FL4以外的其它任何荧光标记），7-AAD可用FL4通道（BD机器）检测。
2、用PBS洗涤1次，去上清，重悬于7-AAD/皂素溶液。每5×10⁶的细胞用400µl重悬。
3、37℃孵育30到60分钟（孵育时间因细胞而异）。
4、置冰上，直至上机检测。如果觉得细胞密度过高，需要稀释，切记要用7-AAD/皂素溶液稀释。