多色流式分析，从方案设计到实施，送你一份简明扼要手册

niwanmao

做多色流式，无论是方案的设计还是最后落地实施，都需要很大的精力。以前，相信大家听过不少讲座，讲了大量的技术指标和参数要求，估计到现在再回想起来，一点都没记住吧！

不要紧，在此，从头到尾给大家理一下流程，相信可以让大家有正确的方向指引，节省一些时间和精力。

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112358answer

倪老师，抗体克隆选择在哪里检索比较靠谱啊？还有在染色中不同染色体系（PBS或者破膜液等），荧光素的选择上有什么讲究吗？还有自己的一个小问题，表染后固定和固定后表染会对结果产生什么影响呢？

niwanmao

112358answer 发表于 2019-9-25 16:31
倪老师，抗体克隆选择在哪里检索比较靠谱啊？还有在染色中不同染色体系（PBS或者破膜液等），荧光素的选择 ...

1、抗体克隆号的选择，一般都是参考文献里面的。
2、固定破膜，与表面染色，荧光素的选择上，目前没那么多讲究，曾经有说法说大分子荧光素很难进去，但实际染色貌似没这么多讲究。
3、我个人建议表面染色后再固定、破膜。先固定，会存在某些抗原位点构象可能被固定改变的风险。

112358answer

niwanmao 发表于 2019-9-25 17:44
1、抗体克隆号的选择，一般都是参考文献里面的。
2、固定破膜，与表面染色，荧光素的选择上，目前没那么 ...

谢谢倪老师！

lxk47640

倪老师，提个问题，一直有些困扰。做全血或者PBMC样品的检测的时候，死活细胞染料的界限真的不好区分，因为淋巴单核粒在本底上死活染料结合表达的效率好像就不一样，应该怎么处理？

niwanmao

lxk47640 发表于 2019-9-29 15:31
倪老师，提个问题，一直有些困扰。做全血或者PBMC样品的检测的时候，死活细胞染料的界限真的不好区分，因为 ...

这个问题与此帖的主题不一样吧。
我不知道你用什么死活染料，如果分不开，首先也需要滴定死活染料，跟抗体一样去找最佳用量；其次你得确保活细胞确实活力好。

btx362237729

感谢倪老师分享

无知的牧羊人

倪老师，看了你提到的如果必须要用荧光渗漏比较大的组合，那么你得在这两个通道中尽量放互斥性表达的抗原。这里提到的互斥性表达的抗原是指什么？类似CD4和CD8这样的么？

niwanmao

无知的牧羊人 发表于 2019-11-5 14:35
倪老师，看了你提到的如果必须要用荧光渗漏比较大的组合，那么你得在这两个通道中尽量放互斥性表达的抗原。 ...

CD4和CD8还是有些T细胞共表达的。
互斥指的是一般不会同时表达在一个细胞上的，例如CD3和CD19，一个是T，一个是B，一般不会共表达。