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多色流式分析,从方案设计到实施,送你一份简明扼要手册

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发表于 2019-9-25 15:24:05 | 显示全部楼层 |阅读模式

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做多色流式,无论是方案的设计还是最后落地实施,都需要很大的精力。以前,相信大家听过不少讲座,讲了大量的技术指标和参数要求,估计到现在再回想起来,一点都没记住吧!
不要紧,在此,从头到尾给大家理一下流程,相信可以让大家有正确的方向指引,节省一些时间和精力。
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发表于 2019-9-25 16:31:51 | 显示全部楼层
倪老师,抗体克隆选择在哪里检索比较靠谱啊?还有在染色中不同染色体系(PBS或者破膜液等),荧光素的选择上有什么讲究吗?还有自己的一个小问题,表染后固定和固定后表染会对结果产生什么影响呢?
 楼主| 发表于 2019-9-25 17:44:09 | 显示全部楼层
112358answer 发表于 2019-9-25 16:31
倪老师,抗体克隆选择在哪里检索比较靠谱啊?还有在染色中不同染色体系(PBS或者破膜液等),荧光素的选择 ...

1、抗体克隆号的选择,一般都是参考文献里面的。
2、固定破膜,与表面染色,荧光素的选择上,目前没那么多讲究,曾经有说法说大分子荧光素很难进去,但实际染色貌似没这么多讲究。
3、我个人建议表面染色后再固定、破膜。先固定,会存在某些抗原位点构象可能被固定改变的风险。
发表于 2019-9-25 19:28:16 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-9-25 17:44
1、抗体克隆号的选择,一般都是参考文献里面的。
2、固定破膜,与表面染色,荧光素的选择上,目前没那么 ...

谢谢倪老师!
发表于 2019-9-29 15:31:34 | 显示全部楼层
倪老师,提个问题,一直有些困扰。做全血或者PBMC样品的检测的时候,死活细胞染料的界限真的不好区分,因为淋巴单核粒在本底上死活染料结合表达的效率好像就不一样,应该怎么处理?
 楼主| 发表于 2019-9-29 21:35:54 | 显示全部楼层
lxk47640 发表于 2019-9-29 15:31
倪老师,提个问题,一直有些困扰。做全血或者PBMC样品的检测的时候,死活细胞染料的界限真的不好区分,因为 ...

这个问题与此帖的主题不一样吧。
我不知道你用什么死活染料,如果分不开,首先也需要滴定死活染料,跟抗体一样去找最佳用量;其次你得确保活细胞确实活力好。
发表于 2019-10-10 16:59:00 | 显示全部楼层
感谢倪老师分享
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