关于巨噬细胞的m1,m2分型问题

濑户内海

最近在跟着老师做有关巨噬细胞分类的课题,实验做完了,但是数据不会用流式软件flowjo分析,项目的实验设计是这样子的: 取小鼠的肺泡灌洗液，做巨噬细胞的的分类，巨噬细胞用 f4/80做生物标志，巨噬细胞会分化成m1和m2细胞，m1用CD86做生物标志；m2用CD206做生物标志。我们取三只小鼠的肺泡灌洗液混合之后分成六管:2、3、4是单染管,5、6是同型对照

管1是电压管,未做染色处理,用来画电压门;

管2 只加f4/80,用apc做荧光标记;

管3只加CD86,做用pe染色荧光标记;

管4用CD206做pe-cy7荧光标记;

管5用f4/80、CD206标记

管6用f4/80、CD86标记

我们目的是想知道m1和m2各自的分化比例。因为之前没有接触过这块内容,所以基础很差,不知道这个门到底该怎么画,也去请教了别的学院对流式这项技术比较了解的老师,目前掌握的知识就是,单染管用来调节补偿,同型管是用来画十字门,排除双阴性细胞的,先把活细胞和细胞碎片区分开,然后圈出巨噬细胞.具体操作流程如下:

用flowjo软件的分析步骤如下:

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后六张图为待测样品,005,006是实验组,加了促进巨噬细胞从m0像m2分化的因素,根据最后两张图,Q3区域为m1细胞,Q1为m2细胞,为什么m1细胞这么少?
请问我的步骤有问题吗?是不是因为画门方法不对导致分析不出来结果?正确的画门方法应该是什么样的呢?导师一直催着要,每日三问,流式做出来了吗??实在是搞不定喔!头都要秃了,求大神帮帮忙,先谢过!!问题解决了,可以再赠送流星~
https://pan.baidu.com/s/1FPFWner ... &shfl=sharepset这个是原始数据

niwanmao

图片好模糊啊。
从这里看，F4/80阳性部分可能都是非特异信号。

生活的意义

没搞懂你画门的逻辑啊，后面几张图好像只有一群细胞

11pzhang

直接把原始数据传上来

濑户内海

生活的意义 发表于 2019-10-17 11:09
没搞懂你画门的逻辑啊，后面几张图好像只有一群细胞

确切的说不知道怎么画合适,您可以给提供一个方向吗,真的很懵,不知道该怎么画这个门

濑户内海

11pzhang 发表于 2019-10-17 11:26
直接把原始数据传上来

https://pan.baidu.com/s/1FPFWner ... &shfl=sharepset
附件上传不了,文件太大,这个是baiduyun的链接

濑户内海

niwanmao 发表于 2019-10-17 09:20
图片好模糊啊。
从这里看，F4/80阳性部分可能都是非特异信号。

倪老师您好,附件在上面的链接里,您能帮忙再看看吗,感谢了

濑户内海

11pzhang 发表于 2019-10-17 11:26
直接把原始数据传上来

你好,原始数据已经上传,您可以帮忙再瞅瞅嘛?

qiulinluo

niwanmao 发表于 2019-10-17 09:20
图片好模糊啊。
从这里看，F4/80阳性部分可能都是非特异信号。

老师，您做过或者了解用THP-1和PBMC诱导分化为M1和M2型巨噬细胞吗？我们在诱导的过程中发现，THP-1单核细胞在诱导分化后，CD14+会下降，几乎都变成阴性；PBMC诱导分化后，CD14+基本或者略有降低，这是为什么？

niwanmao

qiulinluo 发表于 2019-10-28 09:00
老师，您做过或者了解用THP-1和PBMC诱导分化为M1和M2型巨噬细胞吗？我们在诱导的过程中发现，THP-1单核细 ...

降低的话，会不会是变成了DC？诱导的方案或者细胞活力有没有没问题？