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推荐用CD45RO/CD25分析Treg,更客观、更方便

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发表于 2019-11-1 12:34:27 | 显示全部楼层 |阅读模式

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Treg研究越来越火热了,设门方法提出了好几种,主要是CD4+CD25+FoxP3+和CD4+CD25+CD127-/low这两大类。
但是这两类设门分析方法,均无法准确区分出初始Treg和效应Treg,而且容易包含一些foxP3+ non-Treg(虽然表达FoxP3,但是没有Treg的调节功能的CD4+T)。
所以,就需要对设门方法进行改良,使其能够更好区分出真正的Treg及其亚群。

Petsiou A等人在9月30日Cytometry B杂志上介绍了一种改良设门方法,就是采用CD45RO/CD25,实现更客观的对Treg及其两个亚群进行定量,变异程度小,文章出处《A modified flow cytometry method for objective estimation of human CD4(+) regulatory T cells (CD4(+) Tregs) in peripheral blood, via CD4/CD25/CD45RO/FoxP3 labeling》 Cytometry B Clin Cytom. 2019 Sep 30. doi: 10.1002/cyto.b.21841.
下图是设门方法,
主要是以下三个组份:
I——nTreg
II——eTreg
III——FoxP3+ non-Treg
20191101_105642.png


与既往其它方法的对比:
20191101_121822.png


CD45RO/CD25散点图上6个组份在其它经典分析图上的分布对比:
20191101_105140.png
(a)PBMC CD4+T细胞中细胞内FoxP3与CD25表达的典型散点图。绿色点来自组分II(eTregs)的细胞,是稀少的CD25highCD45RO+细胞,这些细胞易被排除掉。
(b)CD4+T细胞I-VI部分在CD25与CD127散点图上的分布。CD127low/-并不纯,除了真正Treg中的组分I、II,还包含了组份III(FoxP3+ non-Treg),以及少量IV(灰色,非Treg)。
(c)CD25与CD4的典型点图,显示了CD4/CD25/CD45RO方案中的部分I至VI。各亚群几乎无法区分。
(d)CD45RO与FoxP3散点图。组份I–III中胞内FoxP3表达强度重叠,并且无法从这样的图中确定组份I–III的比例。

这个改良设门,似乎可以用用看。
发表于 2019-11-1 15:23:54 | 显示全部楼层
倪老师及各位站友好,今天我刚好在尝试做Treg,我想咨询一下,我在CD4、CD25和CD127基础上多用了一个CD3,不知是否有必要?
 楼主| 发表于 2019-11-1 21:21:46 | 显示全部楼层
流传疯 发表于 2019-11-1 15:23
倪老师及各位站友好,今天我刚好在尝试做Treg,我想咨询一下,我在CD4、CD25和CD127基础上多用了一个CD3, ...

有必要,尤其是淋巴和单核分群不清的时候,用CD3会更好。
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