PMA及ionomycin配制分装方法

chujindong · 发表于 2011-3-23 22:15:45

小弟新手，很多东西没做过。买回来PMA和ionomycin，一直不知道该怎么分装。网上没查到特别确定的方法，有人说用1ml DMSO将PMA溶解，然后使用1.5ml 无菌EP管将其分装成100份，每份10微升，储存在-20度。每次使用时取一管再用相应溶液稀释，但又要求不要反复冻融。我算了一下，每次使用的量不到10微升，这就必然会有反复冻融的情况出现。不知道这所谓的“反复冻融”的最大次数是几次？还有ionomycin，就更没头绪了。望各位前辈指点！

sugarswallow · 发表于 2011-3-23 22:15:46

本帖最后由 sugarswallow 于 2011-3-30 09:11 编辑

哦，我们的活化体系是以前的同仁们配制好了的，PMA是5uL每管，离子霉素10ul每管，使用的时候是PMA20倍稀释后，和离子霉素一样，每毫升培养基各加1ulPMA和离子霉素，0.7ul的gorgistop，PMA的工作浓度时是50ng每毫升

llhlz1971 · 发表于 2011-3-24 00:18:36

根据我自己做实验的情况,反复冻融二三次基本没事,第三次用过后废弃即可.

niwanmao · 发表于 2011-3-24 07:58:40

小弟新手，很多东西没做过。买回来PMA和ionomycin，一直不知道该怎么分装。网上没查到特别确定的方法，有人 ...
chujindong 发表于 2011-3-23 22:15

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配制方法可以参见这本书的相关章节（第15页）：http://www.flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=viewthread&tid=128

zhang4083 · 发表于 2011-3-25 21:02:13

如果分装太多的话，比如每个管子只有1ul，过一段时间这1ul几乎就都蒸发掉了。
所以建议10ul保存

chujindong · 发表于 2011-3-25 21:13:23

配制方法可以参见这本书的相关章节（第15页）：
niwanmao 发表于 2011-3-24 07:58

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文章中这么写的：将PMA融于DMSO中，配制成100微克/ml的母液并分装，保存在-20度下（可保存6个月），使用时稀释一百倍。

aninawang · 发表于 2011-3-27 17:03:26

按照你描述的方法分装，每次使用时取出稀释，放4℃，一周左右没什么问题，个人经验。

chujindong · 发表于 2011-3-28 11:49:24

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感谢aninawang

chenry · 发表于 2016-5-16 13:07:46

chujindong 发表于 2011-3-25 21:13
文章中这么写的：将PMA融于DMSO中，配制成100微克/ml的母液并分装，保存在-20度下（可保存6个月），使用时 ...

好难过，我的让师姐在-20度放了两年多，现在CD3亚群CD69活化率只有60%了，基本上报废了。除了买新的，还有什么解决办法吗？

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