小鼠脾脏细胞流式圈门

晴儿

老师们好，麻烦指点一下：谢谢了

第一个问题：








老师们好，我想请教个问题，图一是小鼠淋巴结的流式图，横轴是FSC，纵轴是SSC，分群挺好，分界大概位于FSC的数值50左右。
用相同的电压检测小鼠的脾脏单细胞，图二显示的分群位置位于100左右，图三横轴是FSC，纵轴是CD4，左侧的细胞CD4也有阳性。那么图二我应该如何圈淋巴细胞。位于50左右还是100左右。可以不看图二，直接在图三圈CD4阳性细胞进行后续分析吗？

自己觉得电压不变的话，应该就都在50圈门了吧。那100的分界是怎么回事，为什么50没有分开。
还有左侧细胞的红细胞也会染上CD4的荧光吗，按照50圈门，左侧细胞还是会有CD4阳性。

第二个问题：





小鼠脾脏流式图，图1,2,3应用的不同的CD4的电压检测，450的时候有点压线，600的时候CD4分群在细胞中间，700的时候CD基本全阳性。这是怎么回事呢，应该怎么选择电压。按理说，电压不会影响CD4比例吧。

麻烦老师指点一下。谢谢

niwanmao

不同组织，由于处理上的差异，FSC可发生不同程度的改变，所以只需根据淋巴细胞和碎片的分界位置圈即可。所以你上面的50和100两个位置，都是合理的。有时候如果确定不好，可利用CD3反设门确定。

电压多少合适，一般是用微球或特殊工具确定的。从你里的结果看，也不失为一个好方法，600最好，因为分群分得最开。至于十字门位置，建议根据分群位置而变动，不能固定，因为你的电压变了，阴性位置也会变。

晴儿

niwanmao 发表于 2020-7-21 22:26
不同组织，由于处理上的差异，FSC可发生不同程度的改变，所以只需根据淋巴细胞和碎片的分界位置圈即可。所 ...

老师，这个在100圈门的话，左侧的细胞CD4阳性挺多的，都是碎片非特异性染色吗





这两个图片都是600电压做的，左边是阴性对照，按照阴性对照分的话是下面的黑线，按照右边分群是那条红线，该怎么选择呢。

谢谢老师指点

niwanmao

晴儿 发表于 2020-7-22 09:43
老师，这个在100圈门的话，左侧的细胞CD4阳性挺多的，都是碎片非特异性染色吗

按分群。因为你这个所谓的“阴性”实际上是未染色，这是无法代表背景荧光水平的。

晴儿

niwanmao 发表于 2020-7-22 23:07
按分群。因为你这个所谓的“阴性”实际上是未染色，这是无法代表背景荧光水平的。 ...

谢谢老师