关于机械法分离树突状细胞

忘记 · 发表于 2020-10-14 21:39:27

大家好我们老师叫我们做草鱼肠道树突细胞的亚型分类和抗原呈递等相关方面的内容。课题在师兄之前就开始做了（师兄已毕业没见过）。师兄是用机械法分的，我们现在也是用师兄做过的法子（先制备草鱼脾脏单细胞悬液，通过ficoll分，养7天时间再用percoll梯度离心分）。这方法应该获得DC的纯度不高，师兄之前拍电镜观察到DC。

我和我同门接着做；我准备做CCL20的原核表达，用他来刺激分离出来的DC（通过机械法分离出来的DC是成熟DC还是未成熟DC，我现在也很迷糊，想问下大家）我同门现在做了2个多抗CD8和CD207，他想来分DC。老师我想问下用多抗分DC可行吗？在没有单抗的情况下，我们该怎么提高DC的纯度呢。这个站很好，知识很多，我得慢慢消化。

niwanmao · 发表于 2020-10-15 08:33:45

草鱼的免疫我没接触过，但是感觉挺有意思。
查了下文献，像下面这篇文章，他们是将草鱼的脾脏、肾机械切割为小碎组织，然后滤网过滤（其实你可以用我们流式中文网的那个魔滤、魔杵套装，处理起来会更方便）。过滤之后，以1:1加入1.077 g/mL PerColl，800×g离心20分钟，洗涤两次后，28度培养7-10天，就可以看到不规则形的悬浮DC。
文章里面用的是CD80、CD83、CD86、MHCII等标记，但是测的是mRNA。

Regulatory_Effect_of_Bacillus_subtilis_on_Cytokine.pdf (3.41 MB, 下载次数: 2)

忘记 · 发表于 2020-10-15 11:18:46

好的谢谢老师我会认真阅读这篇文章的

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