流式图中如何区分胞内蛋白与包外蛋白

小怪兽de爸爸

请问各位老师，
所研究的蛋白既表达在细胞膜上，也在内体膜有表达，如何通过流式细胞术区分在细胞膜上表达和内体膜表达量的差异？
下图是我用特异性抗体做的流式，结果出现两个峰，请问这两个峰能说明什么问题吗？
谢谢！

小怪兽de爸爸

请问各位老师，
所研究的蛋白既表达在细胞膜上，也在内体膜有表达，如何通过流式细胞术区分在细胞膜上表达和内体膜表达量的差异？
上图图是我用特异性抗体做的流式，结果出现两个峰，请问这两个峰能说明什么问题吗？
谢谢！

niwanmao

小怪兽de爸爸 发表于 2021-1-27 13:45
请问各位老师，
所研究的蛋白既表达在细胞膜上，也在内体膜有表达，如何通过流式细胞术区分在细胞膜上表达 ...

endosome要染的话，需要破膜，那么：
- 不破膜的时候，染的就是表面
- 破膜之后，再染，是胞膜+内体膜

小怪兽de爸爸

niwanmao 发表于 2021-1-27 14:47
endosome要染的话，需要破膜，那么：
- 不破膜的时候，染的就是表面
- 破膜之后，再染，是胞膜+内体膜 ...

谢谢您，老师。
我上面的流式图是没有破膜直接染的，出现的两个峰如何解释呢？

niwanmao

小怪兽de爸爸 发表于 2021-1-27 16:40
谢谢您，老师。
我上面的流式图是没有破膜直接染的，出现的两个峰如何解释呢？ ...

我不知道你这个是什么分子，应该如何表达，而且阴性位置应该在何处。如果P3位置是阴性，那么就是部分表达。

小怪兽de爸爸

niwanmao 发表于 2021-1-27 18:29
我不知道你这个是什么分子，应该如何表达，而且阴性位置应该在何处。如果P3位置是阴性，那么就是部分表达 ...

您好，老师。
我标记的靶蛋白不确定是否在胞膜与内体膜上均表达。补充图中最左边的红色阴性的峰为阴性峰，右侧两个峰均为同一样本的两个峰，这两个峰能说明什么问题吗？

niwanmao

小怪兽de爸爸 发表于 2021-1-27 23:00
您好，老师。
我标记的靶蛋白不确定是否在胞膜与内体膜上均表达。补充图中最左边的红色阴性的峰为阴性峰 ...

如果不确定表达，你就必须要做好真正的生物学阴性对照，找一个肯定不表达此分子的细胞。