电压和补偿好难调啊！

vinnie

先谢谢各位老师们。
今天的问题是电压和补偿调整。
1、调整方法
听过不同老师说的方法，A老师说单阳管/单标管就行，然后调整补偿，手动补偿就是横平竖直， 自动补偿就是选择低峰（图a）

图a 选择低峰

我的疑问是：选择这块区域是表示FITC通道调整成获取少量粒子的参数吗？而且是单标管的话为什么会出现两个峰呢？
B老师的方式是，将单标管和空白管1：1混合后来调整补偿，自动补偿选择高峰。
现在就是疑惑且迷茫。

2、补偿微球
使用补偿微球的时候发现没有正常的峰出现，一直是跳动的线条，请问是什么情况呢？是电压没有调整好嘛？ 有点像下面这张图但是更无序一些。

图b 补偿微球没有峰

3、电压调整
自动调补偿的方式中调电压，老师说这样已经可以了，可是我觉得高峰再10^2左右，是不是需要电压调高一些呢？

图c 这不需要电压调高一些吗

问题太多了，感觉还有好多需要学习的东西。谢谢您的回答，您的每一份回答让失败的实验死得其所。感谢~

niwanmao

电压，暂以空白管为调节基准，使细胞跑出来在左下角形成近似圆形即可。

补偿，需要有单阳+阴性群体，方可进行逐个调节。

vinnie

niwanmao 发表于 2022-5-23 14:16
电压，暂以空白管为调节基准，使细胞跑出来在左下角形成近似圆形即可。

补偿，需要有单阳+阴性群体，方可 ...

嗯嗯，谢谢倪老师！！就是在BD仪器上自动调补偿的时候，是应该选择高峰还是低峰呢？还是无所谓高低峰，选择的是阳性区域？因为培训的时候老师没有说的很清楚，所以有点混乱。

vinnie

niwanmao 发表于 2022-5-23 14:16
电压，暂以空白管为调节基准，使细胞跑出来在左下角形成近似圆形即可。

补偿，需要有单阳+阴性群体，方可 ...

倪老师，可能我没有说清楚，我有看到说自动调补偿直接记录就行了，但是在培训的时候，软件直接选中了高峰段，结果老师说这个定位不是很准确啊，自己调整一下，就调到低峰那里了，所以我有点疑惑

niwanmao

vinnie 发表于 2022-5-23 15:03
倪老师，可能我没有说清楚，我有看到说自动调补偿直接记录就行了，但是在培训的时候，软件直接选中了高峰 ...

补偿微球产生的阳性峰，应该是只有一个峰才对。

如果细胞产生了两个峰，应该选高的峰。

vinnie

niwanmao 发表于 2022-5-23 17:43
补偿微球产生的阳性峰，应该是只有一个峰才对。

如果细胞产生了两个峰，应该选高的峰。 ...

好的好的，谢谢倪老师！！!