Annexin V-PI法检测凋亡

jingweis530

请问老师在做Annexin V-PI法检测凋亡时，用本身的细胞（不加任何试剂）做空白对照，调好仪器，为什么上测定管时会整团细胞向右移动？不论Annexin V FITC或PE，都会出现这种情况，PE更加厉害。而且还会视不同的细胞，有些细胞移动多点，有些细胞移动少点，请老师指教。（图是word文档，但发不上来）
   
  
  

jingweis530

做空白对照管是用来调仪器的啊，相当于同型对照。说明书上是要求一管什么都不加，一管只加AV，一管加PI，调好仪器后再上机测AV-PI管。

jingweis530

是不是AV-PI法才会出现这种情况？还是凡是双标就会出项这种情况？我们做其他的表型很少出现这种情况的。当做AV-PI法时阴阳表达分得不是很明显时，怎么划十字线？
另外怎么在正确的版块上提问，找遍整个网页好像都没找着。

jingweis530

但我还是不能把我的图贴上去啊

jingweis530

同意，尤其是阴阳分不开的时候。还有做AV-PI法时，AV要调很高的补偿，不知同道们有否这样的情况?

jingweis530

我也觉得应该做空白管，尤其仪器没有调好，分群又不明显时，当一上测定管时，出现细胞群上移或右移，都搞不清楚究竟是细胞本身的表达情况还是仪器是否调好。
我的做法是：先用空白管调好仪器，再上测定管，如果分群不明显的话，在FSC/SSC 图上先gate活性好的细胞，定好十字线，然后再重新把其他细胞gate起来。就是不明白为什么细胞总向右移，还有补偿会调到很高。