|
悬赏3流星未解决
本帖最后由 wolfrog 于 2013-6-29 21:11 编辑
我的CFSE实验取自红细胞裂解法分离的正常Balb/c小鼠脾淋巴细胞。
CFSE来自Invitrogen 的CellTrace™ CFSE Cell Proliferation Kit (C34554)
染色用1uM CFSE 37度10min染细胞(1×10E6cells/ml,1ml)。
5倍体积10%1640培养液冰上5min终止染色,10%1640洗3次。
在24孔板中培养,5×10E5cells/well,1ml/well。
为维持细胞状态加入了终浓度10ng/ml的IL-2,有的孔还加入了anti-CD3 antibody(终浓度1ug/ml)和anti-CD28 antibody(终浓度0.1ug/ml)。看了别的同仁的帖子http://www.flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=viewthread&tid=2479&extra=&highlight=CFSE&page=1,用抗体包被的方法是不是更好?而且发现这位提问者的抗体浓度比我少很多。
刚染色d0天和之后d1d2d3d4都有从孔中取出一些细胞,持续检测CFSE表达水平。
发现CFSE从d1天开始表达下降就很快,而且活细胞群的比例一直很少。d2,d3,d4都没什么区别了。
请大家看看问题在哪里?
是不是我的哪些处理不当,细胞死的太多了?
|
|