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发表于 2013-8-28 00:08:11
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经过两个月的实验，CFSE在外周血单个核细胞（PBMC)的实验中终于检测出明显的增殖表现，自己的体会有下面几点：
1、染色时细胞浓度为2*10e6/ml（细胞一定要混匀）。
2、染色时1-2分钟摇晃一次，时间10分钟。
3、终止是一定要迅速，快速混匀。
但是现在我在做外周血CD4+CD25- T细胞培养，却但碰到了问题。
实验方案：先提取外周血单个核细胞（PBMC)，再行磁珠分选CD4+CD25- T，接着行CFSE染色，然后接种到96孔板上（每孔1*10e5），用抗CD3（5ug/ml，提前包被）+CD28（2ug/ml），培养箱里养3天。但显微镜下观察细胞增殖不明显（没有明显成团），行流式（CFSE）检测也无增殖（结果显示已经染上）。在此实验之前，曾经做过外周血单个核细胞（PBMC)的增值实验，方法同上面一样，结果显微镜下细胞增殖很明显（有明显成团），行流式（CFSE）检测也有增殖。请问大家为什么外周血CD4+CD25- T细胞没有明显增殖？问题在什么地方？ |
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楼主: wolfrog
发表于 2013-8-5 08:30:58
