提取PBMC计数内皮祖细胞 问题多多

niwanmao

sfqiang23 发表于 2011-11-22 23:16

                               
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查阅相关文献做内皮祖细胞的实验，没发现用全血做的啊!
不知能否介绍一篇文献使用全血做的？ ...

这篇不是吗？虽然是小鼠，但是道理是一样的：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/ ... ?tool=pubmed#__sec6

其实用的标本不是问题。PBMC的好处在于细胞纯，可去除部分死细胞或细胞碎片、粒细胞、部分单核的影响，缺点在于容易使某些珍贵的细胞丢失，细胞少的时候更加明显；用全血，可能会由于裂解不全导致红细胞比例过高，但可以通过FSC-SSC排除，而且全血裂解一些珍贵细胞容易得到保留。

chujindong

sfqiang23 发表于 2011-11-22 23:08

                               
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孵育抗体时是室温还是4度冰箱中？

一般室温就可以，各公司抗体说明书要求的条件不一样。要4度孵育的可能是因为荧光抗体的特性，温度会对荧光抗体有一定的影响。

chujindong

niwanmao 发表于 2011-11-23 08:18

                               
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这篇不是吗？虽然是小鼠，但是道理是一样的：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2936325/?too ...

倪老师说的“珍贵细胞”究竟是什么细胞呢？是属于哪一类细胞群？

niwanmao

chujindong 发表于 2011-11-23 10:47

                               
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倪老师说的“珍贵细胞”究竟是什么细胞呢？是属于哪一类细胞群？

只是一种随意的说法，意思就是指这类细胞占的比例很低，例如只有1％或者只有0.几，这个时候，提PBMC就容易丢失。

chujindong

niwanmao 发表于 2011-11-23 10:50

                               
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只是一种随意的说法，意思就是指这类细胞占的比例很低，例如只有1％或者只有0.几，这个时候，提PBMC就容 ...

那确实是这样。其实我算过这个方法提出的细胞量，并不是所有血中的单个核细胞都能被提取出来。

sfqiang23

为什么用同型对照调节完电压和十字线的位置后，测病人实验管时感觉电压较低，且LL的区域有一明显的边缘，而此边缘与同型对照的位置不一样？

niwanmao

sfqiang23 发表于 2011-11-23 13:01

                               
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为什么用同型对照调节完电压和十字线的位置后，测病人实验管时感觉电压较低，且LL的区域有一明显的边缘，而 ...

你的意思是指同型对照的荧光反而比实验管还高？这应该跟同型对照的选择有关，可能是由于同型对照没选对，也可能是同型对照的非特异性结合太高。如果出现这种情况，我建议还是弃用同型对照，选择患者的内对照或者空白对照。

PS：建议这类与主题无关的帖子可另开帖讨论，以免影响话题。

chujindong

sfqiang23 发表于 2011-11-23 13:01

                               
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为什么用同型对照调节完电压和十字线的位置后，测病人实验管时感觉电压较低，且LL的区域有一明显的边缘，而 ...

发个图学习一下。

sfqiang23

我是刚接触内皮祖细胞的，刚开始用的是全血做的，发现表达太低，就改用提取单个核细胞。
后来发现这个主题论坛是先提取后改为全血，而且做得不错。我就很无语了。因为试剂问题，和既往很多文献都用此方法做出来过，我就坚持提取单个核细胞了。
在提取的过程中实验结果老是不理想，我把我的试验步骤发过来了，上面有很多问题，希望各位给于指点。
有些问题已经在本论坛上问过，也得到了满意的回答，有些还是不清楚，望继续指点。谢谢

niwanmao

sfqiang23 发表于 2011-11-27 11:34

                               
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我是刚接触内皮祖细胞的，刚开始用的是全血做的，发现表达太低，就改用提取单个核细胞。
后来发现这个主题 ...

你这个文档中的问题很多，虽然部分跟这个话题重叠，但还是强烈建议你重新开一个帖子，以方便我们进行讨论推荐和打分。敬请谅解。