C57小鼠外周血流式细胞问题请教

cenzhikang

CPUSnape 发表于 2024-7-18 21:35
bd很好，就是相对来说贵一点

好勒 谢谢啦

Fish形影单只

cenzhikang 发表于 2024-7-18 16:00
谢谢，那请问推荐的BD抗体咋样，我看文献里ebioscience和biolegend用的比较多

我都是建议买BD的，可靠。
确实是太贵了，基础的抗体可以买国产或者其他品牌，比如CD3.CD4.CD8这种。

cenzhikang

Fish形影单只 发表于 2024-7-19 10:51
我都是建议买BD的，可靠。
确实是太贵了，基础的抗体可以买国产或者其他品牌，比如CD3.CD4.CD8这种。 ...

谢谢啦，已经跟老板确认买BD抗体了，拿到手后根据站长的帖子先做一个抗体滴定，然后开始预实验

sttstt

Fish形影单只 发表于 2024-7-12 09:45
是的，只需要第一次单独跑，记录好电压和补偿，后面直接调用就行。

大佬  请问一下流式建模可以用未经处理过的细胞（对照组）吗？还是要用实验组呢？

瓜瓜999

Fish形影单只 发表于 2024-7-18 15:49
外周血我都没有用死活，只有组织样本我才加死活。具体加不加还是得看你自己。 ...

请问测外周血里的免疫细胞还需要Fc block吗

瓜瓜999

Fish形影单只 发表于 2024-7-12 15:07
1、取50-100ul抗凝血到流式管中，加入荧光抗体。室温避光30min。（染色、溶血、洗涤全在流式管中进行）
2 ...

我最近也准备做外周血的流式。有几个问题想请教~
1. 我看网上有些protocol是先裂解红细胞，再加抗体孵育。也有一些是先加抗体再裂解。请问会有不同吗？
2. 染色前需要数细胞吗，还是只需要定量（100ul）就行？
3. 染色溶血洗涤可以在普通的eppendorf tube里进行吗？我之前做组织的时候都是在2ml tube搞的，只有在上机测之前转移到流式管里。
谢谢~~

三更灯火

瓜瓜999 发表于 2024-8-8 02:21
请问测外周血里的免疫细胞还需要Fc block吗

需要的，要封闭Fc端，避免非特异性结合

Fish形影单只

瓜瓜999 发表于 2024-8-9 04:44
我最近也准备做外周血的流式。有几个问题想请教~
1. 我看网上有些protocol是先裂解红细胞，再加抗体孵育 ...

1、两个步骤都可以。得注意你的溶血素有没有固定作用，如果有固定作用就得先加抗体再加溶血素。
2、外周血50-100ul都可以，如果是比例很少的细胞，比如treg，我就会拿200ul外周血先溶血，或者用淋巴细胞分离液提取单个核细胞以后再染色。
3、我建议你第一步就在流式管里操作，离心尽量使用水平离心机，细胞丢失率会降低。

瓜瓜999

Fish形影单只 发表于 2024-8-12 14:08
1、两个步骤都可以。得注意你的溶血素有没有固定作用，如果有固定作用就得先加抗体再加溶血素。
2、外周 ...

非常感谢~