流式检测临床患者中性粒细胞的指标，是否可以分批检测、放在一起分析比较？

niwanmao

Eniac 发表于 2024-8-7 15:24
请问老师指的阴性对照是不加ROS探针的空白对照吗？我询问过一些流式老师，有老师给我建议是，每次都招募一 ...

除了健康志愿者的全血之外 ，还可以根据你们的实际情况考虑：
1.未刺激中性粒细胞：使用来自同一患者的中性粒细胞，这些中性粒细胞没有接触过任何已知会诱导ROS产生的刺激，此时应表现出最低的ROS水平。
2.用抗氧化剂处理的中性粒细胞：用抗氧化剂预处理中性粒细胞，如N-乙酰半胱氨酸（NAC）或谷胱甘肽，它们可以清除ROS，从而可建立ROS检测染料的基线荧光。
3.未染色的中性粒细胞：包括未染色的中性粒细胞样本，以评估没有任何ROS检测染料的细胞的自发荧光，可参照此进行偏移评估。

除了阴性对照外，还必须包括阳性对照，以确保ROS检测分析结果的正确性。对于阳性对照，可以使用用已知ROS诱导剂刺激的中性粒细胞，如佛波醇12-肉豆蔻酸13-乙酸酯（PMA）或过氧化氢（H2O2）。
记住在相同的条件下处理所有样品，包括对照，以确保结果一致可靠。

Eniac

好的，谢谢老师回复，给我带来了很大帮助！

yuksing

niwanmao 发表于 2024-8-5 21:23
下列方法可以二选一：
1、Ficoll提取中性粒细胞层，加入冻存液，梯度降温，冻到液氮，等到收集到一定数量， ...

老师，关于第2点，我想请教一下，我们检测CAR-T的CD8+TCR+阳性率时，缺少标准品，能否采用荧光定量微球作为参比品，方便各批次间的对比？现在也有制备1批T细胞做标准品的，但成本较高。

niwanmao

yuksing 发表于 2024-8-12 17:13
老师，关于第2点，我想请教一下，我们检测CAR-T的CD8+TCR+阳性率时，缺少标准品，能否采用荧光定量微球作 ...

CD8和TCR的分群都非常好，应该不难做啊 ，不至于需要进行荧光定量

yuksing

niwanmao 发表于 2024-8-12 21:41
CD8和TCR的分群都非常好，应该不难做啊 ，不至于需要进行荧光定量

是的，分群没问题。作为细胞治疗产品放行检测方法，对方法有批次间可比性的要求，一般是需要有标准品，方便各批次间的数据对比。老师，荧光定量微球可以达到这个标准品的目的吗？

niwanmao

yuksing 发表于 2024-8-13 10:12
是的，分群没问题。作为细胞治疗产品放行检测方法，对方法有批次间可比性的要求，一般是需要有标准品，方 ...

分群清楚就可以，流式检测分群清楚的群体，批间差基本上均可控制在10~15％的CV内。如果超出，通常意味着仪器失控了

分析群体比例，不涉及到荧光定量微球的事情

yuksing

niwanmao 发表于 2024-8-13 10:18
分群清楚就可以，流式检测分群清楚的群体，批间差基本上均可控制在10~15％的CV内。如果超出，通常意味着 ...

好的，谢谢老师，我们每批次检测都有跑仪器的质控微球。这个批间差异的CV控制，还是需要用到参比品（1批T细胞）吧？

niwanmao

yuksing 发表于 2024-8-13 10:23
好的，谢谢老师，我们每批次检测都有跑仪器的质控微球。这个批间差异的CV控制，还是需要用到参比品（1批T ...

质控微球只是基本的第一步

该项目的性能验证，是保证结果稳定，从而确保批间可比性的关键

yuksing

niwanmao 发表于 2024-8-13 10:28
质控微球只是基本的第一步

该项目的性能验证，是保证结果稳定，从而确保批间可比性的关键 ...

谢谢老师的解答。该项目的性能验证方面，我们也做了方法验证。分析群体比例，不涉及到荧光定量微球，意思是荧光定量微球不能用于此类项目的标准品吧？

niwanmao

yuksing 发表于 2024-8-13 15:00
谢谢老师的解答。该项目的性能验证方面，我们也做了方法验证。分析群体比例，不涉及到荧光定量微球，意思 ...

荧光定量微球不适合你这个项目