流式细胞绝对计数的可靠性

chen_yiqian

wxd 发表于 2025-6-19 13:26
你的意思是有的细胞亚群占父群比例有变化，但是标准化成绝对计数就没有差异是吗？那之前占父群比例没有差异 ...

是的，您说的对，我尝试使用总的活细胞数进行标准化，发现比例有变化的亚群，标准化绝对计数后差异消失了，我追溯了这个亚群的父群，发现父群占比改变和该亚群的占比改变是相反的，这应该就是为什么该亚群的比例有改变，但计数没有改变的原因。感觉从侧面能提示，使用总的活细胞计数进行标准化应该是一个合理标准化的方案，同时也能反应为什么我们要在比例的基础上，同时进行绝对计数，因为我们能展示的图往往仅是一个层级的占比，至于他的父群以及以上的分级的亚群我们没有关注，可能会得到错误的结论。

chen_yiqian

niwanmao 发表于 2025-6-19 13:34
你是如何得出所有亚群绝对数均显著降低的结论呢？这说明你已有金标准的手段？ ...

老师您好，我使用的是已知浓度的流式计数微球计算的。

niwanmao

chen_yiqian 发表于 2025-6-19 14:09
老师您好，我使用的是已知浓度的流式计数微球计算的。

那么你如何得出绝对数显著降低的结论？是跟你的预期比？

我认为，只要组织解离充分，绝对计数微球质量过关，这结果就是可信的

chen_yiqian

niwanmao 发表于 2025-6-20 08:31
那么你如何得出绝对数显著降低的结论？是跟你的预期比？

我认为，只要组织解离充分，绝对计数微球质量过 ...

是这样的老师，我在分析的时候发现，实验组的肠道的长度显著短于对照组，实验组肠道的重量显著低于对照组，实验组的总活细胞数量只有对照组的一半，而且实验组的各种细胞亚型都是显著低于对照组，所以我在想，比较两组各亚型细胞数量时，是不是需要对其进行标准化再比较，比如根据总活细胞数量进行标准化，即同等活细胞数量的前提下，这种细胞亚型是减少的还是增多的。因为实际上我的实验组有炎症发生，不应该得到各种免疫细胞反而显著降低的结果。

niwanmao

chen_yiqian 发表于 2025-6-20 09:49
是这样的老师，我在分析的时候发现，实验组的肠道的长度显著短于对照组，实验组肠道的重量显著低于对照组 ...

这样，在确保细胞总数计算正确的情况下，可以将细胞总数除以肠道重量，按照每g多少细胞，这个做法在一些文章上看到过的

tiger

chen_yiqian 发表于 2025-6-19 11:30
老师，您是指用肠道的重量/体重来计算脏器系数对吗。

是的。您在问题提出时强调了“造模组的小鼠肠道的长度、重量均显著低于对照组，尤其是肠道重量仅有对照组的一半”，所以只计算单位重量或长度免疫细胞的变化不能完全反应整体的免疫细胞变化。