3色凋亡

bluefishcyl

不是很会用flowjo
DATA01：阴性
DATA02：转染EGFP单染，怎么会是一条斜线？全部调下来会压线，忘记截图补偿之前的啦！
DATA03：阴性无EGFP，单染AV-PE 感觉PE没有染上，是不是没有凋亡的细胞？
DATA04：阴性无EGFP，单染7aad
DATA05：阴性无EGFP，双染AV-PE和7aad
DATA06：转染EGFP，双染AV-PE和7aad

求真相！！

niwanmao

bluefishcyl 发表于 2012-3-23 22:07

                               
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不是很会用flowjo
DATA01：阴性
DATA02：转染EGFP单染，怎么会是一条斜线？全部调下来会压线，忘记截图补偿 ...

总体的感觉，大约20－30％的细胞死亡。
这些明显的非特异性染色（就是下图中的斜线）没法调下来的，你可以在分析软件中看看，肯定是来源于FSC－SSC图中最左侧FSC最小的那堆碎片/死细胞。


第二个问题，我觉得从上图和下图中都看的出来，AV-PE（即FL2）的电压调的太低了，建议可以调高一些。重要的是，调节的时候可以只看下图FSC－SSC点图中我画的红圈中那堆状态较好的细胞，其它细胞暂时不管。

bluefishcyl

我把egfp单染的门右移了下，右上象限还是有细胞，是不是因为荧光太强了？EGFP电压再调小也移过来，PE电压大了不就下不来了么？
另外，我用空白阴性，没有明显的两群细胞，怎么办？

niwanmao

bluefishcyl 发表于 2012-3-24 13:04

                               
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我把egfp单染的门右移了下，右上象限还是有细胞，是不是因为荧光太强了？EGFP电压再调小也移过来，PE电压大 ...

你的细胞有没有用什么药物处理过？

bluefishcyl

没有哦！

niwanmao

bluefishcyl 发表于 2012-3-24 15:12

                               
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没有哦！

从data.005和data.006来看，转染egfp和不转染的细胞，其FL1的阴性区域也还是相差比较大的（见下图）。所以，到时候设置十字门的时候还是以下面转染egfp这管为准吧，补偿调节的还可以，只是AV-PE的电压建议稍微增高一点。如果设门改变了那个拖尾仍存在，那我觉得没有办法消除了，我只能说很可能跟细胞状态有关，镜下看过细胞状态没有？

bluefishcyl

看过，转染的细胞状态很好，我是对照质粒，荧光很强很多。如果我的空白阴性没有明显的两群，是不是可以用后面的来画门？你需要我的原始数据帮我看看么？谢谢！

niwanmao

bluefishcyl 发表于 2012-3-25 13:50

                               
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看过，转染的细胞状态很好，我是对照质粒，荧光很强很多。如果我的空白阴性没有明显的两群，是不是可以用后 ...

原始数据传上来看看吧。我在想，是不是有可能是因为荧光远远超出检测最高限，从而形成拖尾。

bluefishcyl

我也觉得是荧光太强