流式抗体稀释

niwanmao

violet870807 发表于 2012-10-15 16:30:11

                               
登录/注册后可看大图

100ul细胞也是用PBS重悬的再加1ul抗体好，还是先把100ulPBS和1ul抗体混匀后再加进离心下来的细胞呢？这叫稀释抗体吗？

这个不叫稀释，是加的顺序。应该先重悬再加抗体？

quaner456@163.c

新手初来乍到，学习了

samly0

我样本量大时是先配抗体总体积再分管，再加细胞的，以前我同时标记CD40/CD80/CD86/Iab测不同处理的DC时，因为要测30管样本的DC，我就每种抗体取31ul（多算出1管），取出来后四种一起加到（3100-31x4）ul 预冷的PBS中混匀，再按每管100ul加到离心洗涤弃干净上清的细胞沉淀里重悬细胞，混匀后避光标记的。这样比每管分别加4种微量抗体省事，省抗体，还能减少误差

niwanmao

samly0 发表于 2013-4-2 11:45

                               
登录/注册后可看大图

我样本量大时是先配抗体总体积再分管，再加细胞的，以前我同时标记CD40/CD80/CD86/Iab测不同处理的DC时，因 ...

没错，这些抗体混合叫cocktail。

sunhuihui21200

niwanmao 发表于 2012-7-25 17:21
强烈不建议稀释。
建议如果要减量，最好就使用减少体积的方式进行。

老师，这里的1：1000是不是抗体1ul:100ul重悬的细胞？谢谢

sunhuihui21200

niwanmao 发表于 2012-7-26 17:47
是的，如果临时现配现用的话直接用PBS稀释就可以。

老师，做细胞流式的时候，对于细胞内染色，是不是抗体要用透化缓冲液稀释。那么为什么做其他如细胞荧光、免疫组化，抗体直接用PBS稀释呢？谢谢老师

niwanmao

sunhuihui21200 发表于 2018-1-20 16:55
老师，做细胞流式的时候，对于细胞内染色，是不是抗体要用透化缓冲液稀释。那么为什么做其他如细胞荧光、 ...

不对啊，你说的稀释这个概念，完全是Western和免疫组化的概念。在流式上，一般抗体都不稀释，而是通过滴定，确定最佳抗体用量，然后染色的时候，直接加入最佳用量。