自发荧光（auto-fluorescence）的概念？如何处理？

zdvfsadb

niwanmao 发表于 2023-7-26 16:31
能具体描述一下吗？

我买了Invitrogen™ BrightComp eBeads的GFP补偿微珠，但感觉做补偿的GFP图像还不如直接用FITC偶联的荧光素做出来的好看。我用的转基因动物模型导入了GFP，然后自发荧光的问题也挺头大的，也只能像倪老师说的那样，用Fl1 vs Fl2去看，尽量避开对角线上的细胞群了。

niwanmao

zdvfsadb 发表于 2023-7-26 21:17
我买了Invitrogen™ BrightComp eBeads的GFP补偿微珠，但感觉做补偿的GFP图像还不如直接用FITC偶联的荧光 ...

有可能的。补偿微球是很纯粹的理想条件，而细胞密度与其不同，并且存在自发荧光，所以很难用补偿微球调节到位。

zdvfsadb

niwanmao 发表于 2023-7-26 21:23
有可能的。补偿微球是很纯粹的理想条件，而细胞密度与其不同，并且存在自发荧光，所以很难用补偿微球调节 ...

好的，谢谢倪老师

wmj123456

niwanmao 发表于 2023-7-25 21:42
未染色细胞，跑出来的信号，包括了电子噪音、细胞内代谢产物的自发荧光（即本底）

电子噪音，是用纯水跑 ...

谢谢倪老师的回复。今天又看到一句话，调节电压的判断标准之一，就是要使荧光信号最弱的群体（阴性）与背景噪音（主要是机器的电子噪音）区分开，这也是保证弱阳性群体与阴性群体能得到有效区分的先决条件。怎么能够分开啊？请问这句话要怎么理解？

niwanmao

wmj123456 发表于 2023-7-29 19:49
谢谢倪老师的回复。今天又看到一句话，调节电压的判断标准之一，就是要使荧光信号最弱的群体（阴性）与背 ...

那句话我好像没讲过吧。我记得之前分享的调节电压要求，推荐利用8峰微球的第2个峰。

wmj123456

niwanmao 发表于 2023-7-29 20:59
那句话我好像没讲过吧。我记得之前分享的调节电压要求，推荐利用8峰微球的第2个峰。 ...

是我看到其他地方讲的话，不太理解，所以想请教下您。

niwanmao

wmj123456 发表于 2023-7-29 22:01
是我看到其他地方讲的话，不太理解，所以想请教下您。

电压的优化，请参考我之前推过的：
〖流式细胞仪优化〗电压
https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-5478-1-1.html
(出处: 流式中文网)