溶血顺序不同造成结果差异

niwanmao

yuemin5 发表于 2015-5-8 09:55
谢谢倪老师！ P.S 笔记本已收到。很漂亮。

染色前裂解这一组的标本，你染色完之后有没有用PBS洗涤？

yuemin5

niwanmao 发表于 2015-5-8 14:25
染色前裂解这一组的标本，你染色完之后有没有用PBS洗涤？

没有洗。有那么大影响吗？

niwanmao

yuemin5 发表于 2015-5-20 09:27
没有洗。有那么大影响吗？

染色完毕不洗的话，会有很明显的非特异性染色。因为可能有不少非特异性结合的抗体和游离抗体。

gaga1989xl

niwanmao 发表于 2015-5-20 10:59
染色完毕不洗的话，会有很明显的非特异性染色。因为可能有不少非特异性结合的抗体和游离抗体。 ...

倪老师，您好，关于本帖讨论的问题我最近也遇到了，但是我还没有进行对比实验，您的经验来看裂解后染色并洗涤和染色后裂解洗涤是否存在很明显差异呢？谢谢！

niwanmao

gaga1989xl 发表于 2016-3-14 19:52
倪老师，您好，关于本帖讨论的问题我最近也遇到了，但是我还没有进行对比实验，您的经验来看裂解后染色并 ...

我也没有仔细对比过，但应该存在一些抗原对裂解液敏感，导致后续的结合效果欠佳，所以目前一致的意见都是先染色再裂解。不过如果多聚甲醛固定过，应该顺序没关系。

gaga1989xl

niwanmao 发表于 2016-3-14 20:32
我也没有仔细对比过，但应该存在一些抗原对裂解液敏感，导致后续的结合效果欠佳，所以目前一致的意见都是 ...

谢谢！因为做的是白血病患者外周血的T细胞，通常含有大量肿瘤细胞，因此想通过先溶后染的方式富集较多细胞后再染色，这样可以节约一些抗体，不过具体还要实验对比对结果没有影响才敢这么做

小憨

ddn111 发表于 2015-5-6 15:18
商品化的RBC裂解液有的有固定成分！所以先裂后标记和先标后裂会有差别！

那是说固定后抗体更容易和细胞膜上的抗原结合是吗？

小憨

关于这个问题我也是困扰好久了，到现在也没人能给出一个答案来。
为此我特别查阅了相关资料，找到了一份行标：
《中华人民共和国卫生行业标准》（WS/T——2011）流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群指南（2012.6.1实施）
指南里面推荐：标本处理采用全血溶血法，染色采用先染色后裂红，染色后标本保存方式是10~40℃避光保存、24 h内上机。
我觉得跟我平时的操作还是差挺多的，不过是行标，照着它说的做应该没啥大问题，至少出了问题咱也是有理有据的，不是一拍脑门儿想咋做就咋做的。

niwanmao

小憨 发表于 2016-3-15 14:50
那是说固定后抗体更容易和细胞膜上的抗原结合是吗？

固定之后，胞膜有些抗原构象可能会影响，会影响其与抗体的结合，导致结果误差。

小憨

niwanmao 发表于 2016-3-15 19:54
固定之后，胞膜有些抗原构象可能会影响，会影响其与抗体的结合，导致结果误差。 ...

所以应该不是裂红液含有固定成分造成的差异，因为先裂红、固定后染色方法反而染色效果比较好。