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楼主: mcdfish

[结构和原理] 流式测凋亡这样划线对吗

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 楼主| 发表于 2016-10-27 23:21:04 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2016-10-21 10:32
前面说过了,AV/PI分群都应该是清楚的,如果不清楚,要么抗体问题,要么就是标本处理问题。

至于其它抗 ...

倪老师,我做凋亡实验也有一段时间了。做的是贴壁细胞,主要测定细菌对其凋亡的影响,但是每次做的结果都不一样,感觉很不稳定,影响的因素太多。细胞状态,菌,细胞收集全不全,消化得如何,有没有不小心倒掉细胞(因为样比较多,50+, 所以洗涤时都是将上清直接倒掉,只有最后一部洗的时候是用枪头吸掉的。就这样染一次细胞加上机也要4-5个小时),这些都会影响最后的结果。
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发表于 2016-10-28 16:01:55 | 显示全部楼层
mcdfish 发表于 2016-10-27 23:21
倪老师,我做凋亡实验也有一段时间了。做的是贴壁细胞,主要测定细菌对其凋亡的影响,但是每次做的结果都 ...

如果相差太大,我觉得可能性比较大的是其它实验因素,应该不是流式的问题。即使把细胞倒掉,细胞也应该是成比例减少吧。
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发表于 2016-10-28 22:15:21 | 显示全部楼层
mcdfish 发表于 2016-10-27 23:16
您的意思是当凋亡较多时,只有A Bio这个牌子能分开?我用的是唯赞的

是的,我们紫外诱导时,会有这个现象
唯赞的我们没做平行,只做了三个品牌,我们自己的4A Biotech(四正柏),和一家美国品牌,一家国产的。


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发表于 2016-10-28 22:32:55 | 显示全部楼层
mcdfish 发表于 2016-10-27 23:21
倪老师,我做凋亡实验也有一段时间了。做的是贴壁细胞,主要测定细菌对其凋亡的影响,但是每次做的结果都 ...

你可以把完整的protocol贴上来看看,之前博士论文做的是癌症靶点研究,也做凋亡,各种对照有时候需要做200+样本,因为凋亡和细胞状态关系还是很紧密,染色后放置久了确实会有影响,另外FITC比较容易淬灭也是一个因素。

收集细胞的时候,培养上清收集了吗?有的时候,不同的实验刺激因素会使细胞凋亡的同时不贴壁。
洗样本的时候倒掉上清个人经验倒是不会有太大影响,离心成团,不是非常容易倒掉。
实验设计的时候,种细胞数量,细菌量,开始刺激的细胞生长状态,菌的生长状态,这些最好都固定一个指标,可以把protocol发上来详细讨论一下
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