流式测凋亡这样划线对吗

mcdfish

niwanmao 发表于 2016-10-21 10:32
前面说过了，AV/PI分群都应该是清楚的，如果不清楚，要么抗体问题，要么就是标本处理问题。

至于其它抗 ...

倪老师，我做凋亡实验也有一段时间了。做的是贴壁细胞，主要测定细菌对其凋亡的影响，但是每次做的结果都不一样，感觉很不稳定，影响的因素太多。细胞状态，菌，细胞收集全不全，消化得如何，有没有不小心倒掉细胞（因为样比较多，50+, 所以洗涤时都是将上清直接倒掉，只有最后一部洗的时候是用枪头吸掉的。就这样染一次细胞加上机也要4-5个小时），这些都会影响最后的结果。

niwanmao

mcdfish 发表于 2016-10-27 23:21
倪老师，我做凋亡实验也有一段时间了。做的是贴壁细胞，主要测定细菌对其凋亡的影响，但是每次做的结果都 ...

如果相差太大，我觉得可能性比较大的是其它实验因素，应该不是流式的问题。即使把细胞倒掉，细胞也应该是成比例减少吧。

kuzhierran

mcdfish 发表于 2016-10-27 23:16
您的意思是当凋亡较多时，只有A Bio这个牌子能分开？我用的是唯赞的

是的，我们紫外诱导时，会有这个现象
唯赞的我们没做平行，只做了三个品牌，我们自己的4A Biotech（四正柏），和一家美国品牌，一家国产的。


以下虽涉嫌广告，却是给各位战友提供一个资讯，不喜勿喷，打扰见谅！
您感兴趣，可以申请个4A Biotech试用装试试。marketing@4abio.com
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kuzhierran

mcdfish 发表于 2016-10-27 23:21
倪老师，我做凋亡实验也有一段时间了。做的是贴壁细胞，主要测定细菌对其凋亡的影响，但是每次做的结果都 ...

你可以把完整的protocol贴上来看看，之前博士论文做的是癌症靶点研究，也做凋亡，各种对照有时候需要做200+样本，因为凋亡和细胞状态关系还是很紧密，染色后放置久了确实会有影响，另外FITC比较容易淬灭也是一个因素。

收集细胞的时候，培养上清收集了吗？有的时候，不同的实验刺激因素会使细胞凋亡的同时不贴壁。
洗样本的时候倒掉上清个人经验倒是不会有太大影响，离心成团，不是非常容易倒掉。
实验设计的时候，种细胞数量，细菌量，开始刺激的细胞生长状态，菌的生长状态，这些最好都固定一个指标，可以把protocol发上来详细讨论一下