PBMC里面有多少TH1,TH2,TH17?

cellprobe

niwanmao 发表于 2019-5-30 10:38
因为你需要完美控制细胞分化，所以建议按照这个帖子的刺激方案：http://www.flowcyto.cn/bbs/forum.php?m ...

倪老师，我以前就是用CD3+CD28抗体刺激T细胞，三天后，细胞上清里面的IFN-r的水平很高。所以我觉得CD3+CD28抗体刺激T细胞后，就不再需要PMA刺激了，直接用高尔基体抑制剂处理几个小时以后，就能 用FACS检测细胞内细胞因子的分化，您觉得可以吧。

cellprobe

niwanmao 发表于 2019-5-29 22:23
比例可参考我之前发过的帖子：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-7026-1-1.html
至于验证方法，两种方法 ...

倪老师，天然PBMC里面分离得到的T细胞，用CD3+CD28磁珠激活培养几天后，再用高尔基体抑制剂处理，就可以用FACS检测IFN-r/IL-4/IL-17吗？还是天然PBMC里面分离得到的T细胞，用CD3+CD28磁珠激活培养几天后，再用PMA+Ionomycin+高尔基体抑制剂处理，就可以用FACS检测IFN-r/IL-4/IL-17吗？ 用CD3/CD28处理以后，还要再用PMA+Ionomycin刺激吗？谢谢！！！

有人说T细胞被CD3+CD28磁珠刺激以后，还要用PMA+离子霉素刺激，才能检测到细胞内的IL-17， IL-4 ，IFN-r。但是我买的PMA+离子霉素还没有到，明天就要做试验了。不用PMA+离子霉素刻可以吗？

stf1990

cellprobe 发表于 2019-8-23 21:09
倪老师，天然PBMC里面分离得到的T细胞，用CD3+CD28磁珠激活培养几天后，再用高尔基体抑制剂处理，就可以 ...

我们组的technician跟我们说，即便你用T activator刺激72h，还是需要用PMA+iONO进行刺激。

stf1990

cellprobe 发表于 2019-8-23 21:09
倪老师，天然PBMC里面分离得到的T细胞，用CD3+CD28磁珠激活培养几天后，再用高尔基体抑制剂处理，就可以 ...

不过兄台我想请教一下，你用T activator刺激细胞72h以后，上机前是如何清洗磁珠的？有什么好的经验吗?

niwanmao

cellprobe 发表于 2019-8-23 21:09
倪老师，天然PBMC里面分离得到的T细胞，用CD3+CD28磁珠激活培养几天后，再用高尔基体抑制剂处理，就可以 ...

这样还不如直接用PMA+离子霉素刺激。