请教淋巴细胞增殖问题

zark_00

niwanmao 发表于 2011-4-21 16:54

                               
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8楼的DDN111经验提示我们，CFSE的浓度和配制时间很关键。http://www.flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=redi ...

CFSE,我用的是eBioscience 的，-20℃保存，90ul DMSO原瓶冻干粉复苏成10mM原液，然后按使用量分装-20℃保存，现配现用，避免反复冻融

samly0

我猜楼主活化刺激后只出现一个CFSE峰跟成团生长的细胞有关，我正好也遇到这个问题，后来总结了下原因可能是这样：有时候成团生长的细胞不一定是活化，可能是聚集，我曾用CD3+CD28+IL2单抗来刺激外周血分离的淋巴细胞，发现不能仅用成团生长作为细胞活化的指标。我刚开始培养出成团生长的细胞时，也有做出来也是一个CFSE峰，后来镜下仔细观察了下，细胞虽然成团生长，孔板中的细胞数并没有明显增多，而且细胞团与细胞团之间的间隙里的细胞越来越少，应该是聚集了，而不是活化了（为什么会聚集我一直没明白），后来改进了一下活化的方法，细胞铺板前在96孔板先加同样浓度的CD3+CD28+IL2单抗20ul/孔，置培养箱孵育2小时后，加入180ul/孔吹打混匀细胞悬液，活化的细胞可以看到整个视野成团的细胞是在单层细胞的基础上增加的，而且观察单个细胞，活化的细胞是变大变圆的，原先大小一样的细胞变得大小不一（因为细胞不是全部都能被活化的），这种情况下做出的增殖峰是很明显的。