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楼主: wwwtangya

[结构和原理] 分选效率问题

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发表于 2020-10-13 14:11:32 | 显示全部楼层
xcl881028 发表于 2020-6-1 09:41
一般我在仪器调试完成后会用微球实测一下分选100微球在镜下看看微球实际数量,如果太少或者没有的话可能调 ...

您好!请问能具体说说这个做法是怎样吗?用什么微球什么模式呢?是用板收集的吗?十分感谢!
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发表于 2020-10-14 11:47:31 | 显示全部楼层
用仪器校正用的微球对设备进行校正后,直接分选一定数量的微球就可以,在光镜下很容易看到;至于如何打到玻片上应该不同设备都有不同的方法,简单一点就直接把玻片放到对应的收集适配器上,在对应的分路上面让微球直接分到拨片上面。
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发表于 2020-10-19 17:16:06 | 显示全部楼层
xcl881028 发表于 2020-10-14 11:47
用仪器校正用的微球对设备进行校正后,直接分选一定数量的微球就可以,在光镜下很容易看到;至于如何打到玻 ...

谢谢!请问80-90%是实际镜下看到的微球数是机器计数液滴数的80-90%吗?是在纯度模式下还是富集模式呢?还有的是你们一般实际收集细胞的时候也有80-90%吗?十分感谢!
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发表于 7 天前 | 显示全部楼层
想问一下具体要怎么测分选的活率,得率和纯度啊?新手小白第一次做,没测。
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发表于 6 天前 | 显示全部楼层
西柚 发表于 2025-10-17 22:33
想问一下具体要怎么测分选的活率,得率和纯度啊?新手小白第一次做,没测。 ...

纯度使用8peaks微球测试,或者是带荧光的细胞,分选完回测。一般仪器,没有重大缺陷,纯度不会有太大问题。
得率,也推荐使用微球测试,例如分选下来10000微球,然后稀释到100uL,回测看有多少微球,一般需要至少80%以上。可以和纯度同步测试。一般来说,使用微球测试基本不会有任何问题,如果使用微球都有问题,就不需要浪费细胞了。
活率,只能使用细胞测试。如果仪器设计或者是设置有问题,分下来的细胞活率就会有很大问题,比如每次插拔喷嘴活率不稳定(比如每次活率纯靠运气,从0%-60%不等)。一般细胞分选下来活率有60%以上就算是可以用了。
具体实验,Memorial Sloan Kettering Cancer Center的Flow Cytometry Core Facility 有发过很多实验小tips。
链接在这里:https://fccf.mskcc.org/flow-post-its/Sorting
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