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纯度使用8peaks微球测试,或者是带荧光的细胞,分选完回测。一般仪器,没有重大缺陷,纯度不会有太大问题。
得率,也推荐使用微球测试,例如分选下来10000微球,然后稀释到100uL,回测看有多少微球,一般需要至少80%以上。可以和纯度同步测试。一般来说,使用微球测试基本不会有任何问题,如果使用微球都有问题,就不需要浪费细胞了。
活率,只能使用细胞测试。如果仪器设计或者是设置有问题,分下来的细胞活率就会有很大问题,比如每次插拔喷嘴活率不稳定(比如每次活率纯靠运气,从0%-60%不等)。一般细胞分选下来活率有60%以上就算是可以用了。
具体实验,Memorial Sloan Kettering Cancer Center的Flow Cytometry Core Facility 有发过很多实验小tips。
链接在这里:https://fccf.mskcc.org/flow-post-its/Sorting |
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