磷酸化蛋白流式经验分享

stf1990

麦小光 发表于 2021-7-25 00:23
时间太长了，可以先摸索一下，个人建议根据细胞的不同，30-45min吧，太久了容易碎。而且量也可以适当减少 ...

感谢楼主的回复， 请问30－45min是在室温条件还是2－8摄氏度？

麦小光

stf1990 发表于 2021-7-26 18:35
感谢楼主的回复， 请问30－45min是在室温条件还是2－8摄氏度？

我是在冰上，也就是4℃

dongfangyao

hello 想问一下，换了的细胞还是贴壁细胞么？因为我现在使用贴壁细胞 感觉从消化、清洗再到固定 要一段时间，这段时间会影响磷酸化的修饰水平...

niwanmao

dongfangyao 发表于 2023-4-20 00:14
hello 想问一下，换了的细胞还是贴壁细胞么？因为我现在使用贴壁细胞 感觉从消化、清洗再到固定 要一段时间 ...

按照楼主的说法，应该是染色前消化到半脱离状态，直接进行固定，再接着后续的洗涤、破膜步骤，应该不会影响。