脾脏结肠样本流式分析tregth17

悠游

lukequ 发表于 2023-6-25 22:12
各位大佬，10M个细胞到底是多少个细胞啊？

1千万个，就是10^7

lukequ

我是新手，顺便问一下如何判断哪些荧光通道是相邻的荧光通道？

Ren

lukequ 发表于 2023-6-26 19:50
我是新手，顺便问一下如何判断哪些荧光通道是相邻的荧光通道？

关键看激发光和滤光片，完全一致或滤光片相差很小，就可以认为相邻，可以互相替换，BD或赛默飞都有荧光通道的小程序你可以搜索一下

悠游

lukequ 发表于 2023-6-26 19:50
我是新手，顺便问一下如何判断哪些荧光通道是相邻的荧光通道？

可以用这个网址查看补偿
https://www.aatbio.com/fluoresce ... ectrum-graph-viewer

lukequ

Ren 发表于 2023-6-27 08:37
关键看激发光和滤光片，完全一致或滤光片相差很小，就可以认为相邻，可以互相替换，BD或赛默飞都有荧光通 ...

那我这个FITC、EYFP、PI、PERCP-CY5.5是不是就是相邻的荧光通道了，它们的激发光都是480

Ren

lukequ 发表于 2023-6-28 19:05
那我这个FITC、EYFP、PI、PERCP-CY5.5是不是就是相邻的荧光通道了，它们的激发光都是480
...

不是，他们的检测通道不一样，需要基本重合才行，例如525/45的意思是525是中点，45是宽度，这就限定了接受的范围，传统流式机器上的一个通道可以认为是激光加滤光片，当两个荧光素被同一样激光激发，其发射光谱大致都可在同一滤光片接收，就可认为这两个通道可以相互替换。这是我个人的理解，我也刚接触流式不久，希望各位站友批评指正

柳暗花明

lukequ 发表于 2023-6-28 19:05
那我这个FITC、EYFP、PI、PERCP-CY5.5是不是就是相邻的荧光通道了，它们的激发光都是480
...

实际上着几个荧光相互之间还是有干扰的。

柳暗花明

可以看下。

lukequ

如果Th17细胞加了刺激阻断剂，没时间做了，有保存的方法吗

niwanmao

lukequ 发表于 2023-6-29 22:30
如果Th17细胞加了刺激阻断剂，没时间做了，有保存的方法吗

不是任何时间点都可以保存的。

如果做Th17而没有足够的时间安排的话，建议两个时间点可以保存：
1、刺激之前进行冻存PBMC，这个有不少文章这么做，这样到时候复苏后可批量做。
2、全部染色完成后，用1~2％多聚甲醛固定保存于4℃，24~48小时应该可以保存。