Treg检测后分析

liuxin

[小老鼠的血，做Foxp3固定破膜后的细胞群只有两群吗？我做的第一次好像就一群（除了碎片）。第二次两群，是单核细胞的没有了吗？正常不破膜的血不应该是三群吗？

第一次

第二次

叶绿素

niwanmao 发表于 2012-2-9 13:26

                               
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除了左下角是碎片和红细胞，其它都是淋巴细胞，可能有少量单核细胞会混在其中，但最终还是需要用标记进行 ...

谢谢倪老师！

chujindong

liuxin 发表于 2012-2-9 15:16

                               
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好的~我已经上传了新的图，您的看法是什么？多谢指教。

左下角碎片，中间很确定是淋巴细胞，最上面大群细胞是粒细胞，没有看到明显的单核细胞群。SSC可以调大点，看是不是分群更清楚些。可能单核细胞确实少。不过我觉得基本不影响你做Treg了。

niwanmao

liuxin 发表于 2012-2-9 18:27

                               
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恩，绿色的是CD4阳性的。也是用全血做的！破膜后有能看到单核细胞的吗？是不是单核细胞的比例很低，所以 ...

你做的这只小鼠单核比例很少，不成群，看不清很正常

liuxin

niwanmao 发表于 2012-2-9 16:46

                               
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绿色这堆是CD4阳性的细胞，是吧？那么右侧那堆SSC大的有可能是粒细胞，因为虽然CD4＋只能代表一部分T淋巴 ...

恩，绿色的是CD4阳性的。也是用全血做的！破膜后有能看到单核细胞的吗？是不是单核细胞的比例很低，所以不容易看见呢？要是不破膜看的到嘛？（看动物、人不同标本的正常值范围想treg这些不好找的，应该在哪里找比较好。大家推荐一个吧）

niwanmao

liuxin 发表于 2012-2-9 15:15

                               
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这是新的图，前面的是碎片，中间的是淋巴细胞，后面的是粒细胞？对吗？还是说出了前面的碎片其余的根本就 ...

绿色这堆是CD4阳性的细胞，是吧？那么右侧那堆SSC大的有可能是粒细胞，因为虽然CD4＋只能代表一部分T淋巴细胞，但是他在淋巴细胞内应该是均匀分布的，所以基本上可以确定右侧SSC大的细胞不是淋巴细胞。

你是不是用小鼠全血做的？那应该是正常现象啊。

liuxin

chujindong 发表于 2012-2-9 13:34

                               
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不同的标本细胞分群是有差别的。我感觉一般单核细胞可能会比较少，但是淋巴细胞群都是存在的。建议你发图时 ...

好的~我已经上传了新的图，您的看法是什么？多谢指教。

liuxin

niwanmao 发表于 2012-2-9 13:19

                               
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刚才咋一看还真的以为横坐标FSC纵坐标SSC，还以为粒细胞分成两堆。现在仔细看了下，才发现纵坐标是FSC， ...

这是新的图，前面的是碎片，中间的是淋巴细胞，后面的是粒细胞？对吗？还是说出了前面的碎片其余的根本就一个细胞群。在CD4标记的时候，最右上角的细胞群也有点如图 对比一下。前面的图是后面的图但是只显示CD4阳性结果（没有做CD3的抗体）

chujindong

不同的标本细胞分群是有差别的。我感觉一般单核细胞可能会比较少，但是淋巴细胞群都是存在的。建议你发图时还是颠倒一下坐标吧，感觉文献里、论坛里没有见过这样的，容易误解。

niwanmao

叶绿素 发表于 2012-2-9 12:33

                               
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哪位老师给标注一下啊，看看各群是什么？

除了左下角是碎片和红细胞，其它都是淋巴细胞，可能有少量单核细胞会混在其中，但最终还是需要用标记进行确定。
PS：刚才看到你已通过实名认证，故加了50颗流星，现在你已有83颗流星了，加迟了，抱歉。

niwanmao

liuxin 发表于 2012-2-9 12:41

                               
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那您做的FS、SS 图是几群细胞呢？要是方便的话您能发一张图吗？（注：我发得那个图是SS/FS的，不是FS/SS ...

刚才咋一看还真的以为横坐标FSC纵坐标SSC，还以为粒细胞分成两堆。现在仔细看了下，才发现纵坐标是FSC，那么这堆应该都是淋巴（除了左下角那堆碎片/红细胞外）。单核细胞至少从FSC－SSC图上看不出来。

我认为，如果你要确定淋巴细胞，建议不要单纯用物理参数，因为很容易混进单核、红细胞等，还是需要加上CD3等标记。

破核膜之后，FSC－SSC是会发生改变的，这是正常现象，不要管它。