同型对照的上机

CRP

请问大家一个基础的问题，关于同型对照我理解其设置的目的与意义，以前流式实验我都没用过同型对照的，这次有了，比方我做一个2色的检测，是先调补偿呢？还是先上同型对照？或者说这两个需要怎样的协调？另外单染调补偿是否需要加入另外一个的同型对照？
以2色实验为例，CD3-FITC，CD4-PE，上机时我应该怎么设计样品？先后次序如何？请教高手指点！
先谢谢您了！

niwanmao

kobe327292007 发表于 2013-5-3 20:03

                               
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内对照的意思就是拿抗体染不表达的同种细胞做阴性对照画出marker线，然后测试样品的时候荧光超过marker线 ...

不是。
内对照是指同一个标本内其它正常表达或不表达该类抗原的细胞。举个例子，我们要测急性淋巴细胞白血病原始细胞上CD3的表达，如何确定其阴性界限，就用粒细胞作为阴性界限的设置标准，因为粒细胞肯定不表达CD3，那么如何判断CD3的染色操作没有问题呢？就用患者标本中残留的正常T淋巴细胞，因为它肯定高表达CD3。以上提到的粒细胞和正常T淋巴细胞都属于内对照。所以内对照是一个比较广的概念，除了可用来设置MARKER外，还可确认染色质量。

kobe327292007

niwanmao 发表于 2012-9-15 22:24

                               
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如果存在不表达该标记的细胞，可以直接用内对照。如果没有，可以用同型对照。 ...

内对照的意思就是拿抗体染不表达的同种细胞做阴性对照画出marker线，然后测试样品的时候荧光超过marker线即为阳性是么？

niwanmao

yoyo13146905 发表于 2012-9-15 12:40

                               
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楼上，我想请教一下，有的机子有三个激光，有不同的通道，请问是不是也用高表达的细胞和不表达的细胞也组成 ...

如果存在不表达该标记的细胞，可以直接用内对照。如果没有，可以用同型对照。

yoyo13146905

楼上，我想请教一下，有的机子有三个激光，有不同的通道，请问是不是也用高表达的细胞和不表达的细胞也组成两两对照，谢谢。

niwanmao

bluefishcyl 发表于 2012-9-13 21:04

                               
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marker线 是什么意思？

就是一条线段，界定阳性区域或者阴性区域，或者界定某种表达强度的区域，一般软件里面用M加数字表示，所以称为marker

bluefishcyl

marker线 是什么意思？

CRP

niwanmao 发表于 2012-3-1 10:33

                               
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了解你的心情，很希望有个人直接帮你把所有问题一股脑儿解决掉。

但是，老实说，我的观点是，QQ真的只适 ...

好吧，谢谢您的帮助

gcz5340

同意倪老师观点，有问题开新帖，方面后面学习的人。

niwanmao

CRP 发表于 2012-2-29 22:25

                               
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您说的很好，很专业，请问我可以加您QQ好友吗？我有N多问题需要解决，先谢谢您了! ...

了解你的心情，很希望有个人直接帮你把所有问题一股脑儿解决掉。

但是，老实说，我的观点是，QQ真的只适合一般性的聊天，技术交流在论坛上最适合，因为把交流通过论坛帖子的方式公开出来，一大批的人都能看到，这个时候，大量观点的碰撞，经常会擦出火花，而且这些讨论过程给后来者看，后来者有时候问题都不需要提，直接就能看到解决方案。相当于这个过程既帮助自己，又使所有人都受益。

stef1981

gcz5340介绍得很详细，但个人觉得单标补偿仅能作为参考，不能以此来绝对确定marker线。因为单标只加了一种荧光，双标和三标加的荧光素比较多，就算调了补偿，细胞整体（包括阴性细胞）荧光强度也会向右上角偏移，超出marker线，造成误差。
我们通常就不用单标补偿了，而是双标补偿。比如说做免疫分型，先上CD117-PE/CD7-FITC，选成熟淋巴细胞，对FL1调补偿，因为成熟淋巴细胞上只有CD7没有CD117。然后用CD10--PE/CD19-FITC，选成熟粒细胞，对FL2调补偿，因为成熟粒细胞上只有CD10没有CD19。做其它检测也是同样的道理，必须结合自身实践，再适当调整，也不能太严谨。一点见解，不对请指正。